耐低温反硝化聚磷菌的分离筛选及脱氮除磷性能研究.pdf

摘要

由氮磷等营养物质引起的水体富营养化损害着人类健康和生态系统功能，现

已成为整个环境领域的焦点问题。反硝化除磷技术因其低耗、高效、节约碳源等

优势而倍受广泛关注。然而，在我国北方和西南大部分地区冬季气温较低（＜

10℃），低温环境抑制了反硝化聚磷菌的生长速率和自身的酶活性，从而降低其

脱氮除磷效率。本研究从低温自然环境中分离筛选耐低温高效反硝化聚磷菌，优

化其生长条件，探索其在低温条件下的脱氮除磷特性，并从分子生物学和功能基

因组学等方面探究反硝化除磷菌的耐低温脱氮除磷机理及耐冷机制，得到以下结

论：

（1）从冬季河水底泥样品中共筛选出2株耐低温反硝化聚磷菌B5-1和B5-2，

结合细胞形态学特征观察和16SrDNA测序分析，初步鉴定菌株B5-1为维罗纳假

单胞菌Pseudomonasveronii，菌株B5-2为基尔假单胞菌Pseudomonaskielensis。

这2株菌对NO3--N（初始浓度100mg/L）的去除率分别为71.00%和72.65%，对

TP（初始浓度10mg/L）的去除率分别为78.41%和71.51%。

（2）将菌株B5-1和B5-2进行复配，得到复配菌B5-12较单一菌株B5-1对

TN和TP的去除率分别提高10.77%和5.70%，较单一菌株B5-2对TN和TP的去

除率分别提高11.91%和13.11%，并确定复合菌B5-12中菌株B5-1和B5-2的最

佳复配比例为2:1。分别以NO3--N和NO2--N作为唯一氮源，复合菌B5-12对NO3--N

（初始浓度100mg/L）和NO2--N（初始浓度100mg/L）的去除效率分别为73.30%

和66.45%，对TP的去除率分别为98.70%和92.71%，表现出良好的反硝化除磷

性能。氮平衡分析结果表明，分别有19.39%的初始NO3--N和14.04%的初始NO2--N

通过反硝化作用转化为含氮气体，有35.95%的初始NO3--N和43.47%初始NO2--N

通过同化作用转化为细胞内氮。考察好氧/厌氧条件下的培养时间对复合菌脱氮除

磷性能影响，结果表明反硝化聚磷菌在储存PHB后利用O、NO--N和NO--N

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为电子受体，但由于厌氧条件下缺少O2的参与，导致电子受体不足，使复合菌对

磷的吸收能力随着暴露在厌氧条件时间的增加而降低。

（3）以复合菌生长量OD600和培养基中NO3--N、TN及TP去除率为考察指

标，对复合菌B5-12依次进行碳源种类、C/N、P/N、pH、温度和摇床转速等单因

素实验，最终确定复合菌B5-12的最佳培养条件为：碳源为柠檬酸钠，C/N比为

10、P/N比为0.1、pH为7.5、培养温度为8℃、摇床转速为140r/min。

（4）复合菌B5-12进行宏基因组测序，结合复合菌B5-12基因组在KEGG

功能注释结果和脱氮除磷性能实验，推测复合菌B5-12的两条脱氮途径，途径一：

NO--N→NO--N→NO→NO→N；途径二：NO--N→NO--N→NH+-N→N。

3222324Intracelluar

除磷途径为：利用O2或NO3--N、NO2--N为电子受体，氧化由乙酰辅酶A合成的

PHB以获取能量，将无机磷转化为多聚磷酸盐的形式储存在细胞内。

（5）复合菌B5-12在4℃和20℃下的转录组学测序结果表明，共转录出4686

个基因，其中2525个为差异基因。差异基因的GO富集分析显示，当温度降低时，

复合菌大量调整了与细胞膜、信号感知、能量转运的相关基因；差异基因的KEGG

富集分析结果显示与ATP合成、氨基酸代谢、膜转运、脂肪酸去饱和酶和热休克

蛋白等相关的基因在低温诱导下表达上调。

关键词：反硝化聚磷菌，耐低温，分离鉴定，同步反硝化除磷，转录组

IsolationandScreeningofLow-temper