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生物检材中单乙酰吗啡、吗啡和可待因的测定

1范围

本标准规定了血液、尿液、组织及毛发中单乙酰吗啡、吗啡和可待因的免疫筛选法、气相色谱-质谱联用法和液相色谱-串联质谱法测定方法。

本标准适用于血液、尿液、组织及毛发中单乙酰吗啡、吗啡和可待因的免疫筛选法、气相色谱-质谱联用法和液相色谱-串联质谱法定性定量分析。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-2008，ISO3696：1987，MOD）GA/T122毒物分析名词术语

第一篇免疫筛选法

3原理

采用高度特异性的抗原-抗体反应的免疫胶体金层析技术，通过单克隆抗体竞争结合吗啡偶联物和尿液中可能含有的吗啡，试剂盒含有被事先固定于膜上测试区（T）的吗啡偶联物和被胶体金标记的抗吗啡单克隆抗体。

4试剂

吗啡尿液胶体金法试剂盒（MOP）。

5操作方法

用吸管吸取尿液检材，滴入试剂盒的样品孔中5滴（约150～200μL），3~5分钟后观察结果。

6结果判定

6.1阳性

仅质控区C出现紫红色带，而测试区T无紫红色带，提示尿液中存在吗啡类物质。6.2阴性

质控区C及测试区T均出现紫红色带，提示尿液中无吗啡类物质或尿液中吗啡浓度在300ng/mL以下。

6.3无效

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质控区C未出现紫红色带，结果无效，应重新检验。

第二篇气相色谱-质谱联用法

7原理

单乙酰吗啡、吗啡和可待因在约pH9.2时可用氯仿:异丙醇(9:1)从生物检材中提出，用丙酸酐使单乙酰吗啡、吗啡和可待因结构上的羟基基团丙酰化后，用气相色谱-质谱联用仪进行检测，经与平行操作的单乙酰吗啡、吗啡或可待因对照品比较，以保留时间和特征碎片离子定性分析。

8试剂和材料

除另有规定外，试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。

8.1单乙酰吗啡、吗啡和可待因对照品纯度≥99%。

8.2单乙酰吗啡、吗啡和可待因对照品溶液的制备

分别精密称取对照品单乙酰吗啡、吗啡、可待因各适量，用甲醇配成1mg/mL的对照品储备溶液，置于-18oC冷冻保存，保存期为1年。试验中所用其它浓度的标准溶液均从上述储备液稀释而得，储存在4℃冰箱中，保存期为6个月。

8.3氯仿。

8.4异丙醇。

8.510%氢氧化钠溶液。

8.6丙酸酐。8.7吡啶。

8.8硼砂缓冲液pH9.0～9.2。

8.9甲醇。

8.10丙酮。

8.110.1%十二烷基磺酸钠溶液。

8.120.1%洗洁精溶液。

8.13浓盐酸。

8.140.1mol/L盐酸溶液。

8.15MSTFA。

8.16乙腈。

9仪器

9.1气相色谱-质谱联用仪配有电子轰击源（EI）。

9.2分析天平

感量0.1mg。

9.3微波炉。

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9.4涡旋混合器。

9.5离心机。

9.6恒温水浴锅。

9.7空气泵。

9.8移液器。

9.9具塞离心试管。

9.10冷冻研磨机。

10测定步骤

10.1样品预处理

10.1.1尿液直接提取

取尿液2mL置于10mL具塞离心管中，用10%氢氧化钠溶液调至pH9.0～9.2，加入1mL硼砂缓冲液，用氯仿:异丙醇(9:1)3mL提取，涡旋混合、离心，转移有机层至另一离心管中，约60。C水浴中空气流下吹干。残留物中加入丙酸酐(50μL)、吡啶（20μL），混匀，微波炉(500W)衍生化3min，60。C水浴中空气流下吹干，残留物用30μL甲醇溶解，取1μL进气相色谱-质谱联用仪分析。

10.1.2尿液中总吗啡或可待因的提取

取尿液2mL置于10mL具塞离心管中，加入0.2mL浓盐酸沸水浴中水解30min，取出，冷却后加入1mL正丁醇，涡旋混合、离心，弃去有机层，用10%氢氧化钠溶液调至pH9.0~9.2，以下同10.1.1项下操作。

10.1.3血液直接提取

取血液2mL置于10mL具塞离心管中，加入2mL硼砂缓冲液，用氯仿:异丙醇(9:1)3mL提取，以下同10.1.1项下操作。

10.1.4组织提取

将组织剪碎或匀浆，称取2g，加