《发酵工艺学》第8章微生物工程下游技术.pptx

第8章微生物工程下游技术;原料液中目标产物的浓度一般都很低，如L-异亮氨酸浓度为2.4％，青霉素为3.6％，庆大霉素为0.2％，胰岛素仅为0.001％。

原料液中成分复杂，常存在与目标分子结构极其相似的分子及异构体。

当生物技术产品是食品或药物时，溶剂的使用受到一定的限制，萃取、色谱等手段会受到一定的限制。

发酵液成分一般不稳定。;发酵液放罐后，应及时快速操作，原因在于

1.菌体可能自溶

2.容易被杂菌污染

3.引起产物的破坏和降解。原料液中常存在降解目标产物的杂质，如可水解目标蛋白质的蛋白酶。;下游技术可分为4个阶段，即预处理、提取、精制、成品制作。

下游技术一般工艺过程;预处理→细胞分离→细胞破壁(胞内产物)

加热过滤匀浆法

调pH离心研磨法

絮凝膜分离酶解法

碎片分离→提取→精制→成品制作

离心沉淀(重)结晶浓缩

双水相吸附干燥

膜分离萃取色谱分离无菌过滤

超滤膜分离

结晶;原料液;第一节发酵液预处理;凝聚与絮凝;凝聚和絮凝;常用絮凝剂;;3、调整PH

4、加入反应剂

环丝氨酸发酵液，氯化钙、磷酸盐生成沉淀。;高价无机离子的去除

Ca2+草酸

Mg2+三聚磷酸钠

Fe3+黄血盐（普鲁士蓝）

蛋白质去除

加热

调pH(草酸，无机酸或碱);蛋白质的变性;;;二、离心;高速冷冻离心机;旋转过滤机;;;;;;;;;细胞破碎（cellrupture）技术是指利用外力破坏细胞膜和细胞壁，使细胞内含物包括目的产物成分释放出来的技术。

细胞破碎技术是分离纯化细胞内合成的非分泌型药物成分的基础。;一些蛋白质在细胞培养时被宿主细胞分泌到培养液中，其后续分离和纯化都相对简单。

但由于一些重组DNA产品结构复杂，必须在细胞内组装来获得生物活性，如果在培养时被宿主细胞分泌到培养液中，其生物活性往往有所改变，此类产品是细胞内产品（非分泌型），需要应用细胞破碎技术破碎细胞，使重组的药物成分释放出来，为后续的分离纯化做好准备工作。;1.酶消化法;2.机械法;细胞破碎仪;四、

结

晶;??1.结晶的特点

（1）只有同类分子或离子才能排列成晶体，因此结晶过程有良好的选择性。

（2）通过结晶，溶液中大部分的杂质会留在母液中，再通过过滤、洗涤，可以得到纯度较高的晶体。

（3）结晶过程具有成本低、设备简单、操作方便，广泛应用于氨基酸、有机酸、抗生素、维生素、核酸等产品的精制。;2.结晶过程;;5.重结晶;重结晶的操作过程;;进入生长期的青蒿;青蒿素分离精制方法

采用恒温振荡浸提法提取，活性炭脱色，75%(v/v)乙醇重结晶。;分离实例——西地兰;;氯仿液;水层;第三节膜分离;根据质量、体积和几何形态差异进行分离。如过滤、微滤和超滤。;膜分离的特点

①分离效能高。

②膜分离过程都不发生相变，能耗低。

③膜分离过程的工作温度在室温附近，膜分离设备本身没有运动的部件，结构紧凑、维修费用低，易于自动化。

④设备体积小，占地少。

⑤膜分离可直接插入已有的生产工艺流程。;;按膜孔径大小分类

微滤膜

0.02～10μm

超滤膜

0.001～0.02μm（1～20nm）

反渗透膜

0.0001～0.001μm（0.1～1nm）

纳米过滤膜

平均直径2nm。;;中空纤维超滤膜结构;膜污染的处理与再生

用物理方法清洗

化学清洗方法

①起溶解作用的物质：酸、碱、酶（蛋白酶）、螯合剂、表面活性剂、分散剂。

②起切断离子结合作用的方法：改变离子强度、pH、电位。

③起氧化作用的物质：过氧化氢、次氯酸盐。;3.3膜组件的结构和特点;;;;3.4膜分离在生物工程中的的应用;浓缩大分子

纯化去杂质（植物成分）

去热原

过滤除菌;小分子产物的回收;除内毒素;蛋白质的回收与脱盐;渗透蒸发;第四节其他常用操作技术;一、浓缩;;;;;中药浓缩罐。除去一些水。不同颜色管道不同功能。黑红色为蒸汽，蓝色为料液。;二、冻干;三、喷雾干燥;;;;多级萃取

;1.1％葡聚糖水溶液与等体积0.36％甲基纤维素钠水溶液相混合并静置后，可得到两个粘稠液层。;利用亲水性高分子聚合物的水溶液可形成双水相的性质，开发了双水相萃取法(twoaqueousphaseextraction);双水相萃取技术的