基因工程的基本内容.pptVIP

**基因工程的基本内容**基因决定性状（一）青霉菌能产生对人类有用的抗生素——青霉素基因决定性状（二）**豆科植物的根瘤菌能够固定空气中的氮基因决定性状（三）**家蚕能够吐出蚕丝为人类利用定向基因改造设想**设想一能否让禾本科的植物也能够固定空气中的氮？能否让细菌“吐出”蚕丝？设想二能否让微生物产生出人的胰岛素、干扰素等珍贵的药物？设想三经过多年的努力，科学家于20世纪70年代创立了可以定向改造生物的新技术——基因工程。基因工程概念** 基因工程：在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出所需要的基因产物。基因工程的别名基因拼接技术或DNA重组技术操作环境生物体外操作对象基因操作水平DNA分子水平基本过程剪切→拼接→导入→表达结果人类需要的基因产物基因工程过程示意图**①从细胞中分离出DNA①②③④⑤⑥②限制酶截取DNA片断③分离大肠杆菌中的质粒④DNA重组⑤用重组质粒转化大肠杆菌⑥培养大肠杆菌克隆大量基因基因工程操作的工具**需要基因的剪刀——限制性内切酶。将目的基因片断从人体细胞内提取，01需要基因的针线——DNA连接酶。将目的基因与运载体DNA连接，02需要基因的运输工具——运载体。将目的基因运入大肠杆菌，03限制性内切酶**分布：主要在微生物中。特点：特异性，即识别特定核苷酸序列，切割特定切点。结果：产生黏性未端（碱基互补配对）。举例：大肠杆菌的一种限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的切割点上将DNA分子切断。目前已发现的限制酶有200多种。限制性内切酶的作用过程**DNA连接酶**问题连接酶的作用：将互补配对的两个黏性末端连接起来，使之成为一个完整的DNA分子。连接的部位：磷酸二酯键，不是氢键。用DNA连接酶连接两个相同的黏性未端要连接几个磷酸二酯键？DNA连接酶的作用过程**运载体**作用：将外源基因送入受体细胞。条件：能在宿主细胞内复制并稳定地保存。具有多个限制酶切点。具有某些标记基因种类：质粒、噬菌体和动植物病毒。要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物体内进行表达，首先得将这个基因送到乙生物的细胞内去。能将外源基因送入细胞的工具就是运载体。基因操作的基本步骤**目的基因与运载体结合贰提取目的基因壹目的基因的检测和表达肆将目的基因导入受体细胞叁1.提取目的基因**将需要的基因从供体生物的细胞内提取出来。01取出DNA02用限制酶切断DNA03目前被较广泛提取使用的目的基因有：苏云金杆菌抗虫基因、人胰岛素基因、人干扰素基因、种子贮藏蛋白基因、植物抗病基因等。042.目的基因与运载体结合**用与提取目的基因相同的限制酶切割质粒使之出现一个切口，将目的基因插入切口处，让目的基因的黏性末端与切口上的黏性末端互补配对后，在连拉酶的作用下连接形成重组DNA分子。01提取质粒并用限制酶切割02用连接酶将目的基因和质粒连接033.将目的基因导入受体细胞并扩增**基因工程中常用的受体细胞有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌和动植物细胞等。导入受体细胞常用的方法是借鉴细菌或者病毒侵染细胞的途径。通常还要对一些受体细胞进行增大通透性的处理。目的基因可以随着受体细胞进行快速的繁殖，在很短的时间内获得大量的基因。1将目的基因导入受体细胞2将受体细胞进行扩增3目的基因的检测和表达**01多细胞生物的检测，将每个受体细胞单独培养并诱导发育成完整个体，检测这些个体是否摄入目的基因，摄入的基因是否表达（是否表现出相应的性状）。淘汰无变化的个体，保留有相应变化的个体进一步培养、研究。02例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。