仪器分析法：紫外可见分光光度法.ppt

当c的单位为g·L-1b的单位为cm时，k以a表示，称为吸光系数(absorptioncoefficient)，其单位为L·g-1·cm-1，此时式（2-2）变为c的单位为mol·L-1b的单位为cm01这时k常用表示。称为摩尔吸光系数(molarabsorptivity)，其单位为L·mol-1·cm-102A=εbc03用邻二氮菲分光光度法测铁。已知溶液中Fe2+的浓度为500?g·L-1，液层厚度为2cm，在508nm处测得透射比为0.645。计算：吸光系数a、摩尔吸收系数(MFe=55.85g·mol-1)12例题：解：A=-lgT=-lg0.645=0.190（三位有效数字）c=500?g·L-1=5.00×10-4g·L-1b=2cm②①二偏离朗伯一比尔定律的因素定量分析时，通常液层厚度是相同的，按照比尔定律，浓度与吸光度之间的关系应该是一条通过直角坐标原点的直线。但在实际工作中，往往会偏离线性而发生弯曲。若在弯曲部分进行定量，将产生较大的测定误差朗伯一比尔定律只对一定波长的单色光才能成立，但在实际工作中，即使质量较好的分光光度计所得的入射光，仍然具有一定波长范围的波带宽度。在这种情况下，吸光度与浓度并不完全成直线关系，因而导致了对朗伯一比尔定律的偏离。所得入射光的波长范围越窄，即“单色光”越纯，则偏离越小。01非单色光所引起的偏离02非吸收作用引起的偏离非吸收作用引起的对朗伯一比尔定律的偏离，主要有散射效应和荧光效应，一般情况下荧光效应对分光光度法产生的影响较小。散射效应：朗伯一比尔定律只适用于十分均匀的吸收体系。当待测液的体系不是很均匀时，入射光通过待测液后将产生光的散射而损失，导致吸收体系的透过率减小，造成实测吸光值增加朗伯—比尔定律是建立在均匀、非散射的溶液这个基础上的。如果介质不均匀，呈胶体、乳浊、悬浮状态，则入射光除了被吸收外，还会有反射、散射的损失，因而实际测得的吸光度增大，导致对朗伯—比尔定律的偏离荧光效应:当入射光通过待测液，若吸光物质分子吸收辐射能后所产生的激发态分子以发射辐射能的方式回到基态而发射荧光，结果必然使待测液的透光率相对增大，造成实测吸光值减小。（三）化学反应引起的偏离溶质的离解、缔合、互变异构及化学变化也会引起偏离。其中有色化合物的离解是偏离朗伯—比尔定律的主要化学因素。例如，显色剂KSCN与Fe3+形成红色配合物Fe(SCN)3，存在下列平衡：Fe(SCN)3Fe3++3SCN－溶液稀释时，上述平衡向右，离解度增大。所以当溶液体积增大一倍时，Fe(SCN)3的浓度不止降低一半，故吸光度降低一半以上，导致偏离朗伯—比尔定律。2.3紫外—可见分光光度计UV-VisSpectrophotometers一、基本组成generalprocess光源单色器样品室检测器显示1.光源在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。可见光区：钨灯作为光源，其辐射波长范围在320～2500nm。紫外区：氢、氘灯。发射180～375nm的连续光谱。23145出射狭缝。聚焦装置：透镜或凹面反射镜，将分光后所得单色光聚焦至出射狭缝；准光装置：透镜或返射镜使入射光成为平行光束色散元件：将复合光分解成单色光；棱镜或光栅入射狭缝：光源的光由此进入单色器；将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出一任波长单色光的光学系统。2.单色器3.样品室样品室放置各种类型的吸收池（比色皿）和相应的池架附件。吸收池主要有石英池和玻璃池两种。在紫外区须采用石英池，可见区一般用玻璃池。检测器利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号，常用的有光电池、光电管或光电倍增管。结果显示记录系统检流计、数字显示、微机进行仪器自动控制和结果处理二、分光光度计的类型typesofspectrometer1.单光束简单，价廉，适于在给定波长处测量吸光度或透光度，一般不能作全波段光谱扫描，要求光源和检测器具有很高的稳定性。0.575光源单色器吸收池检测器显示双光束自动记录，快速全波段扫描。可消除光源不稳定、检测器灵敏度变化等因素的影响，特别适合于结构分析。仪器复杂，价格较高。国际上通常采用吸光度的准确度来表示仪器的光度准确度，常用酸性重铬酸钾法进行检测。1、光度的准确度：是指样品在最大吸