《畜禽产品致病菌梯型熔解温度等温扩增技术规范》征求意见稿.pdf

ICS67.050

CCSX04

JAASS

团体标准

T/JAASSXX—2022

畜禽产品致病菌梯型熔解温度

等温扩增技术规范

Technicalspecificationforladder-shapemeltingtemperatureisothermal

amplificationofpathogenicbacteriainlivestockandpoultryproducts

（征求意见稿）

2022-XX-XX发布2022-XX-XX实施

江苏省农学会  发布

T/JAASSXX—2022

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

本文件由江苏省农学会提出并归口。

本文件起草单位：江苏省农业科学院、许昌学院。

本文件主要起草人：张辉、王德国、包红朵、周艳、张永清、孙军涛。

II

T/JAASSXX—2022

畜禽产品致病菌梯型熔解温度等温扩增技术规

1范围

本标准规定了畜禽产品致病菌单核细胞增生李斯特菌、沙门氏菌和产气荚膜梭菌DNA的提取、梯

型熔解温度等温扩增、检测及结果判定方法和操作规范。

本标准适用于畜禽产品致病菌的核酸定量检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB4789.30食品安全国家标准食品微生物检验单核细胞增生李斯特氏菌检验

GB4789.4食品安全国家标准食品微生物检验沙门氏菌检验

GB4789.13食品安全国家标准食品微生物学检验产气荚膜梭菌检验

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB16548病害动物和病害动物产品生物安全处理规程

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T27403实验室质量安全控制规范食品分子生物学检测

NY/T541动物疫病实验室检验采样方法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4生物安全措施

工作人员应具备微生物相关资质，所有使用培养物和废弃物应按照GB19489中的有关规定执行。

5原理

选择Tm值曲线为梯型（包括人字梯型、半人字梯型和直梯型）的特异性核酸片段为靶序列设计巢

式引物，将巢式引物的外引物与内引物分别连接成一对引物作为等温扩增用引物，借助外引物与核酸靶

序列上对应片段的熔解温度差异提供单链模板，在DNA聚合酶（大片段）催化下通过合成反应与链替代

反应对梯型Tm值曲线的靶标核酸片段进行等温扩增，进行不同致病菌的定量分析技术。

6试剂和材料

6.1离心机；实时荧光定量PCR仪；培养箱；生物安全柜；核酸含量分析仪

1

T/JAASSXX—2022

DNA提取试剂盒；Tris-HCl；乙二胺四乙酸（EDTA）；异硫氰酸胍；TritonX-100。；异丙醇；TE

溶液(pH8.0)；饱和酚；氯仿；异戊醇；TaqDNA聚合酶；BstDNA聚合酶；DEPC水、甜菜碱（Betain）、

dNTPs、MgSO4、ThermoPolTM