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色谱分析法概论;色谱分析法概论;概述;;概述;概述;概述;概述;概述;分类方法:〔1〕以两相所处的状态分类;;概述;(2)按操作形式
柱色谱、平板色谱
①柱色谱;②平板色谱法〔薄层色谱、纸色谱〕
;概述;概述;(3)按别离机理
吸附色谱法
〔absorptionchromatography〕
分配色谱法
〔partitionchromatography〕
离子交换色谱法
〔ionexchangechromatography〕
空间排阻色谱法〔又称分子排阻色谱法〕
〔sizeexclusionchromatography〕;;;;;;;;;;;;;⑹调整保存体积VR‘:保存体积与死体积之差,
其本质为组分停留在固定相时所消耗流动相的体积;V0和Vm、t0和tm的区别;:指将待测物的保存行为换算成相当于正构烷烃的保存行为(范围内组分的定性参数)。
;;;;容量因子k的计算
;;;;例1一个气相色谱柱,由固定液的涂量及固定液在柱温下的密度计算得Vs=14.1mL,载气流速为43.75mL/min。别离一个含A、B、C三组分的样品,测得组分保存时间组分A为1.41min、组分B为2.67min、组分C为4.18min、空气为0.24min。
试计算:
〔1〕死体积〔假定检测器及柱接头等体积可忽略〕
〔2〕各组分的调整保存时间和分配系数
〔3〕相邻组分的分配系数比α;解:
;;
3.色谱别离的根本理论
3.1分配系数与保存行为的关系
;;;等温线对其他色谱有指导意义;
一般使用对称性因子(symmetryfactor)评价色谱峰的对称性。对称因子的计算式为
;中国药典2005年版:拖尾因子;;3.3塔板理论;〔1〕在柱内一小段高度内组分分配瞬间达平衡〔H→理论塔板高度〕
〔2〕载气非连续而是间歇式进入色谱柱,每次进气一个塔板体积
〔3〕样品和载气均加在第0号塔板上且忽略样品沿柱方向的纵向扩散
〔4〕分配系数在各塔板上是常数,与组分在某一塔板上的量无关;;3.3塔板理论;3.3塔板理论;3.3塔板理论;;;塔板理论的特点;塔板理论的局限性;vanDeemter
方程式;3.4速率理论;B/u
纵向扩散项;3.4速率理论;涡流扩散项〔多径扩散项〕:A;影响因素:填充柱〔2~5mm〕
固定相颗粒越小,填充越均匀,A项越小;纵向扩散???〔分子扩散项〕:B/u;B/u—纵向扩散项:;讨论:①γ——与填充物有关的因子〔扩散阻碍因子〕
空心柱γ=1
填充柱γ1
②纵向扩散与u成反比
u大,B/u可忽略
u小,不可忽略
③Dg——组分在气相中的扩散系数
M载气大,Dg小,如:N2
M载气小,Dg大,如:H2,He;影响因素:;;产生原因:
样品在气液两相间分配,样品未及溶解就被带走,从而造成峰扩张;讨论:;3.4速率理论——柱效与流速;3.4速率理论——柱效与流速;1.被别离组分分子在色谱柱内运行的多路径、浓度梯度所造成的分子扩散及传质阻力使气液两相间的分配平衡不能瞬间到达等因素是造成色谱峰扩展柱效下降的主要原因。
2.通过选择适当的固定相粒度、载气种类、液膜厚度及载气流速可提高柱效。
3.速率理论为色谱别离和操作条件的选择提供了理论指导。说明了流速和柱温对柱效及别离的影响。
4.各种因素相互制约,如载气流速增大,分子扩散项的影响减小,使柱效提高,但同时传质阻力项的影响增大,又使柱效下降;柱温升高,有利于传质,但又加剧了分子扩散的影响,选择最正确条件,才能使柱效到达最高。;3.5影响别离度的因素;3.5影响别离度的因素;4.根本类型色谱法的别离机制;;;;5.色谱法的开展趋势;毛细管电色谱
(CEC);小结
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