工具酶的发现和基因工程的诞生.ppt

根据酶的来源不同，可以将这些酶分为两类：1.从大肠杆菌中分离得到：E.coliDNA连接酶，只能将双链DNA片段互补的粘性末端之间连接。2.从T4噬菌体中分离到：T4连接酶，既可以“缝合”双链DNA片段互补的粘性末端，又可以“缝合”双链DNA片段的平末端，但连接平末端之间的效率比较低。1.1工具酶的发现和

基因工程的诞生什么叫基因工程？基因工程又叫基因拼接技术或DNA重组技术。就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。基因工程的别名操作环境操作对象操作水平基本过程实质结果基因拼接技术或DNA重组技术生物体外基因DNA分子水平人类需要的基因产物剪切→拼接→导入→表达基因重组科技探索之路基因工程诞生的理论基础：DNA是生物遗传物质的发现、DNA双螺旋结构的确立以及遗传信息传递方式的认定基因工程的技术保障：限制性核酸内切酶、DNA连接酶和质粒载体的发现与应用DNA重组技术的基本工具添加标题准确切割DNA的工具（“基因的剪刀”）添加标题DNA片段的连接工具（“基因的针线”）添加标题基因转移工具（“运载体”）010203基因的大小以纳米计算，要对它进行剪切、拼接等操作，没有非常精细的工具是不行的。进行基因操作最少需要以下三种工具：识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。微生物数千种1、来源：2、种类：3、作用：4、结果：形成两种末端一、“基因的剪刀”——限制性核酸内切酶黏性末端平末端限制酶切割DNA后形成的末端——黏性末端、平末端是如何形成的？重播大肠杆菌(E.coli)的一种限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。什么叫黏性末端？当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时，被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。什么叫平末端？思考：如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？要切两个切口，产生四个黏性末端。会产生相同的黏性末端，然后让两者的黏性末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？二、“基因的针线”——DNA连接酶DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，即把梯子两边扶手的断口连接起来，这样一个重组的DNA分子就形成了。基因进入受体细胞的运载体假如目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样？作为载体没有切割位点将怎样？目的基因是否进入受体细胞，你如何察觉？如果载体对受体细胞有害将怎样？作为运载体的必要条件能够在宿主细胞中复制并稳定地保存；具多个限制酶切点，以便与外源基因连接；具有某些标记基因，便于进行筛选。对受体细胞无害三、基因的运载工具——运载体质粒是细胞染色体外能够自主复制的双链环状DNA分子。存在于细菌、酵母菌和放线菌等生物中。常用的运载体：1）细菌细胞质的质粒2）噬菌体或某些动植物病毒大肠杆菌的质粒：最常用的质粒是大肠杆菌的质粒，其中常含有抗药基因，如四环素的抗性基因。根据酶的来源不同，可以将这些酶分为两类：1.从大肠杆菌中分离得到：E.coliDNA连接酶，只能将双链DNA片段互补的粘性末端之间连接。2.从T4噬菌体中分离到：T4连接酶，既可以“缝合”双链DNA片段互补的粘性末端，又可以“缝合”双链DNA片段的平末端，但连接平末端之间的效率比较低。*