2025年基因工程复习资料 .pdfVIP

先天下之忧而忧，后天下之乐而乐。——范仲淹

基因工程复习资料

重组DNA技术

指将一种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，然

后转入另一种生物体（受体）内，使之按照人们的意愿稳定遗传并表

达出新产物或新性状的DNA体外操作程序，也称为分子克隆技术。供

体、受体、载体是重组DNA技术的三大基本元件。

基因工程

指重组DNA技术的产业化设计与应用，包括上游技术和下游技术

两大组成部分。上游技术指的是基因重组、克隆和表达的设计与构建

（即重组DNA技术）；下游技术则涉及到基因工程菌或细胞的大规模

培养以及基因产物的分离纯化过程。

基因工程的两个基本特点∶分子水平上的操作和细胞水平上的表

达。

基因工程的意义：

⑴大规模生产生物活性物质⑵设计、构建生物的新性状甚至新物

种⑶分离、扩增、鉴定、研究、整理生物信息资源。

基因工程的基本条件：

A核酸操作的工具酶：限制性核酸内切酶、DNA连接酶、DNA聚

合酶、核酸酶、核酸修饰酶。B用于基因克隆的载体：载体的功能及特

征、质粒、噬菌体或病毒DNA、考斯质粒与噬菌粒、人造染色体载体

C用于基因转移的受体菌或细胞：受体细胞应具备的条件、各种

基因工程受体的特性、实验室常用的基因工程受体

限制性核酸内切酶的生物功能：

识别双链DNA分子中的特定序列，并切割DNA双链。主要存在

于原核细菌中，帮助细菌限制外来DNA的入侵细菌的限制与修饰作用。

限制性核酸内切酶的类型：

主要特性I型II型III型

限制修饰多功能单功能双功能

蛋白结构异源三聚体同源二聚体异源二聚体

古之立大事者，不惟有超世之才，亦必有坚忍不拔之志。——苏轼

辅助因子ATPMg2+SAMMg2+ATPMg2+SAM

识别序列TGAN8TGCT旋转对称序列GAGCC

AACN6GTGCCAGCAG

切割位点距识别序列1kb处识别序列内或附近距识别序列下游

随机性切割特异性切割24-26bp处

II型限制性核酸内切酶的基本特性：

识别双链DNA分子中4-8对碱基的特定序列，大部分酶的切割位

点在识别序列内部或两侧，识别切割序列呈典型的旋转对称型回文结

构。

II型限制性核酸内切酶的切割方式：

平头末端5’粘性末端3’粘性末端

II型核酸内切酶的多酶联合酶解：

对盐浓度要求相同的酶，原则上可以同时酶切，但应注意：

对盐浓度要求不同的酶，可采取下列方法：

（1）使用较贵的酶的盐浓度，加大便宜酶的用量，同时酶解

（2）低盐酶先切，然后补加盐，高盐酶再切

（3）一种酶先切，然后更换缓冲液，另一种酶再切

影响限制性核酸内切酶活性的因素：

（A）DNA样品的纯度（B）DNA样品甲基化程度（C)限制性核

算内切酶缓冲液性质（D)酶的纯度（E)DNA分子的构型（F)酶的反应

温度和时间

载体：基因工程中携带外源基因进入受体细胞的“运载工具”，

本质是DNA复制子。