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脑膜炎双球菌血浆凝固酶试验[原理和意义]致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，使人或动物血浆发生凝固，因此，测定血浆凝固酶的有无是鉴定葡萄球菌致病性的重要依据。步骤：01血浆血浆02金葡白葡03++04凝集（+）05不凝集（-）06生理盐水07++08无菌操作：09血浆凝固酶试验血浆凝集试验结果链球菌侵入体内产生SLO，刺激机体产生相应抗体ASO，当两者中和后，再加入SLO乳胶试剂，因病人血清中ASO量很多，未被中和掉的抗体与乳胶试剂反应，产生清晰凝集，为阳性；无凝集，为阴性。方法：间接凝集结果：效价大于400单位意义：风湿热及其活动性的辅助诊断抗“O”试验（ASOtest）原理：01020304步骤：？阴性对照（1滴）待检血清（1滴）++胶乳试剂（1滴）胶乳试剂（1滴）2min052min抗“O”试验（ASOtest）第五次实验内容操作：肥达试验肉毒梭菌、产气荚膜菌标本肥达实验肥达试验（Widaltest）是用已知的伤寒杆菌O、H抗原和甲、乙型副伤寒杆菌H抗原与病人血清做定量凝集试验，以测定患者血清中有无相应抗体，根据抗体含量的多少以及增长情况，可帮助诊断伤寒及副伤寒。【原理】肥达反应稀释法示意表试验管（每管0.5ml）对照管1234567生理盐水0.50.50.50.50.50.50.5-1“O”抗原0.50.50.50.50.50.50.52“H”抗原0.50.50.50.50.50.50.53PA抗原0.50.50.50.50.50.50.54PB抗原0.50.50.50.50.50.50.5血清最终稀释度1:401:801:1601:3201:6401:1280-G+菌细胞壁结构致密，肽聚糖层厚，脂质含量少，乙醇不易进入。1G-菌细胞壁结构疏松，肽聚糖层薄，含大量脂质，乙醇易渗入。2通透性学说G+菌等电点（pI2~3）G-菌等电点（pI4~5）在相同pH条件下G+菌所带负电荷比G-菌多，所以与带正电荷的结晶紫染料结合较牢固，不易脱色。12等电点学说化学学说G+菌菌体内含有大量核糖核酸镁盐，可与碘、结晶紫等染料牢固结合，使已着色的细菌不易被乙醇脱色G-菌菌体内含核糖核酸镁盐很少，故易被脱色95%乙醇脱色时间。05冲洗的方法，不要对着涂片区。04染色的时间控制：一一半一。03固定的程度。02涂片的厚度。01注意事项细菌基础培养基的制备（示教）细菌分离接种技术（操作）平板划线接种法；斜面培养基接种法液体培养基接种法；半固体穿刺接种法细菌在培养基上生长现象（观察）第二次实验内容一、细菌基础培养基制作液体培养基制作普通肉汤培养基成分：新鲜牛肉浸液100ml，蛋白胨1g，NaCl0.5g称量，包装，灭菌后使用。固体培养基制作称取营养琼脂4.5g，加入100ml蒸馏水中溶解。包装后灭菌使用。斜面培养基制作（6、摆斜面）加琼脂、溶化、定容、（过滤）分装、加塞、包扎灭菌操作步骤称量及溶化调pH细菌的分离接种接技术分离培养平板分离划线接种法（操作）纯培养半固体培养基接种法（操作）斜面培养基接种法液体培养基接种法平板分离划线接种法连续划线法②分段划线法平板划线接种法（分离培养法）IVIII1/5I1/10Rotate90?FlameloopRotate90?Rotate90?III1/4Flameloop”各区之间接种环要灭菌用力适当，不要划破琼脂表面注意事项：注意无菌操作培养结果斜面培养基接种法（操作）用途：常用于扩大纯种细菌及实验室保存菌种。液体培养基接种法结果：沿穿刺线生长——动力-扩散生长——动力+方法：穿刺接种半固体培养基接种法（操作）液体固体细菌在培养基上生长现象菌落菌苔半固体沉淀—成链生长浑浊—均匀分散生长菌膜—表面生长（需氧菌）动力+动力-固体培养基生长现象液体培养基中生长现象混浊生长沉淀生长表面生长半固体培养基中生长现象有鞭毛动力+无鞭毛动力－沿刺线生长混浊生长细菌在培养基上生长现象培养基生长现象