实验7核酸的提取.pptVIP

CompanyLogoCompanyLogoCompanyLOGOCompanyLOGO实验七动物组织核酸提取与鉴定一、实验原理CompanyLogo核酸是生物体最重要的组成成分之一。动物组织细胞中的核糖核酸（RNA）与脱氧核糖核酸（DNA）大部分与蛋白质结合，以核蛋白的形式存在。因此分离核酸时必须使核酸与蛋白质分离，并除去蛋白质。本实验是将组织匀浆后加水饱和酚溶液，振荡使蛋白质变性，变性蛋白质溶于酚相或两界面处形成凝胶层。而DNA或RNA则溶于上层的水盐溶液中。在离心后上层的水盐溶液中加入乙醇，核酸不溶于乙醇而形成白色絮状沉淀析出。DNA与RNA均由单核苷酸组成，每个单核苷酸中含有磷酸、嘌呤与嘧啶、戊糖（核糖、脱氧核糖)。核酸用硫酸水解后，即可游离出这三种物质。用下述方法可分别鉴定出这三类物质。磷酸：用钼酸铵与之作用可生成磷钼酸，磷钼酸可被氨基萘酚磺酸还原成蓝色钼蓝嘌呤碱：用硝酸银与之反应生成灰褐色的絮状嘌呤银化合物。戊糖:核糖:用硫酸使之生成糠醛，糠醛与3，5－二羟甲苯综合成为一种绿色化合物脱氧核糖：在硫酸作用下，与二苯胺生成蓝色化合物二、试剂及器材CompanyLogo钼酸铵试剂氨基萘酚磺酸3，5－二羟甲苯溶液二苯胺试剂0.9%NaCl20％三氯醋酸水饱和酚预冷的95％乙醇浓硫酸5%硝酸银5%硫酸实验步骤一：动物组织中核酸的提取CompanyLogo匀浆制备：全班制备一份。取冻存兔肝20g置匀浆器中，加入0.9%NaCl溶液60ml制成匀浆。提取：将匀浆取出分装在四个100ml塑料离心管内，分别加入1mol/LNaCl溶液15ml，混匀，再加入水饱和酚溶液40ml，剧烈振荡10min，然后4000rpm离心20min。将上清轻轻吸入一烧杯中，每2人一组取上清液4ml于小离心管中，加入等量的预冷的95%乙醇，即可见白色沉淀逐渐析出，静置10min后，3500rpm离心10min，倾去上清，即得白色的核酸钠沉淀。实验步骤二、核酸的水解CompanyLogo在含有核酸钠盐的离心管内加入5%硫酸4ml，用玻璃棒混匀，转入小试管中，在沸水浴中加热15min。实验步骤三、DNA与RNA成分鉴定CompanyLogo（1）嘌呤碱的鉴定：加入硝酸银后，观察有什么变化？静止15min后再比较两管中沉淀颜色有何变化？试管号水解液5%硫酸浓氨水5%硝酸银1220滴————20滴数滴呈碱性数滴呈碱性10滴10滴磷酸的鉴定沸水浴中加热数分钟，观察两管颜色变化。管号水解液5%硫酸钼酸铵试剂氨基萘酚磺酸1210滴————10滴5滴5滴20滴20滴核糖的鉴定：沸水浴中加热10min，比较两管颜色变化。管号水解液5%硫酸3，5－二羟甲苯溶液124滴————4滴6滴6滴CompanyLogoCompanyLogoCompanyLOGOCompanyLOGO