抗肿瘤药物实验法.ppt

死亡分析：动物体重减轻、明显的感染等都会影响实验的可靠性，必须追究原因（是否给药剂量过大等）。阳性对照：通常选用对所选瘤株敏感的已知抗肿瘤药作阳性对照。如S180、EAC皮下型可用环磷酰胺20～30mg／(kg·d)；L615可用5-Fu25mg/(kg·d)。在同类型化合物抗肿瘤试验时，最好使用同类型临床有效的药物。一日量可用l/3～1/5LD50剂量参考同类药物临床剂量参考同类药物动物剂量预实验,开始有动物死亡计量的l/3～1/5为一日量5剂量的选择1.4待筛药物的给药途径化学合成药、抗生素滤液及植物药的提取物，通常用ip、sc或ig给药，其他途径有im、iv等。01.随机02.小鼠体重相差不超过4g；03.每组小鼠平均体重相差不宜超过1g；04.每组大鼠平均体重相差不宜超过5g。6动物分组7疗效评价实体瘤疗效评价在治疗期间给药组死亡超过20％，或平均体重(去瘤后)下降(自身对照)超过15％者，表示药物毒性反应，减少剂量重新试验。瘤重抑制率％=(1-T／C)×100％中草药抑制率大于30％，合成药大于40％，并经统计学处理有显著差异时，认为有苗头，继续重复，连续3次，疗效稳定，则评定此药有一定疗效。腹水型肿瘤疗效评价：逐日记录动物死亡情况。对照组通常2-3周内死完。如对照组动物7天内死亡≥20％；或20％存活4周以上，实验作废。治疗组观察时间一般为30天或60天(生存超过此时限者，仍按30天或60天计算)。分别记录对照组和治疗组的平均生存时间，按下列公式计算生命延长率：生命延长率％=(T／C—1)×100％非腹腔给药时生命延长率大于50％，或腹腔给药生命延长率大于75％，并经统计学处理有显著差异时，认为有苗头，需继续试验。连续3次，疗效稳定，则评定此药有一定疗效。8瘤株的选择目前临床上常用的抗肿瘤药大多首先经动物移植性肿瘤筛选而发现的，从寻找新药角度看来，按照我国目前条件和情况，筛选细胞毒类药物时可选用肉瘤Sl80腹水型或实体型、艾氏癌腹水型(EAC)或实体型(ESC)、肝癌Hep腹水型(HAC)或实体型(H22)、Lewis肺癌LL、白血病L1210和P388、黑色素瘤B16、肉瘤S37、肠癌C38、C26及Walker癌肉瘤W256等。从天然产物中寻找新抗肿瘤药物可选用S180实体型、ESC、LL、L1210和P388、B16、HepA或S、肠癌C26、C38、子宫颈癌U14、白血病L615以及W256等。企图用一种模型去筛选各种不同类型的新药，显然是不恰当的，因为各种动物移植瘤对抗癌药物的敏感性不一样。0102冷冻保存液可以改变细胞或瘤块的渗透性，减少细胞内的水分，防止水分在细胞内产生大量冰晶，如含15％的甘油或10％二甲基亚砜的培养基。12速融，冻存管迅速放入38-40度水浴，RPMI1640液洗涤1-2次，接种。3冻存时，慢冻（引起的细胞损伤最小），损伤是由于在极少量未结冰水中保留了高浓度电解质引起，因此细胞从0～-20C间冷冻速度要缓慢，一般以每分钟降1C为宜。然后再将安瓿放置于干冰(固体CO2)或液氮中保存。一般可保存6个月左右。9肿瘤的低温保存1.10移植性肿瘤实验法举例小鼠腹水型L1210模型【基本原理】将小鼠白血病L1210瘤细胞悬液ip小鼠，给予不同剂量抗癌活性药物，可延长荷瘤宿主的生命。【操作步骤】(1)无菌取DBA/2小鼠约7d的L1210腹水，生理盐水配制成瘤细胞悬液，细胞数为5×106/ml，ip小鼠0.2ml(L1210细胞105个)。每组6-10只动物。（雄性,l8-22g，雌性17-21g，每次实验均用同一性别），接种当天为d0。d1称重、随机分组，给药，包括阴性对照(溶剂)及阳性对照药，一般用腹腔注射(方案可有多种：仅给1次，次日给药；每日一次，连续7天；于第1、5天或第1、5、9天每隔4天给药一次等)。记录30天内各组动物的死亡情况，至第30天，统计各组动物的平均死亡率。【结果计算】根据公式计算试药对L1210的延长生命率。(L1210平均存活期8-1ld。一般腹水型肿瘤的实验观察期为30d，未死亡动物以30d计)。【方法评价】01本法也适用P388、EAC、HepA、w256及S180等腹水型移植性肿瘤模型。02给药组第5天动物存活数应大于65％，否则表示药物剂量过大。03若阴性对照组动物在15d内仍不死亡，说明实验失败，应分析原因，重做。041.10.2实体瘤模型以肉瘤S180皮下接种1.10.2实体瘤模型以肉瘤S180皮下接种【基本原理】皮下接种同种宿主前肢腋下S180，给予抗癌活性的药物，可以抑制肿瘤在体内的生