实验一鸡胚接种.ppt

实验一鸡胚接种病毒培养的宿主系统：本动物实验动物：家兔、小白鼠、大白鼠、豚鼠、鸡胚体外培养的器官、组织细胞实验目的

了解鸡胚的基本结构与功能，掌握常用的鸡胚接种方法。原理

鸡胚为活的动物机体，组织分化程度低，病毒易于增殖，可选择不同的日龄和接种途径，感染病毒的组织和液体中含大量病毒。鸡胚10日龄病毒鸡新城疫病毒（NDV）照蛋灯打孔器石蜡注射器蛋座酒精棉球、碘酊棉球二、材料三、鸡胚的结构与功能卵壳上有细孔，进行气体交换壳膜使气体分子和液体分子在内外两方面进行交换。气室呼吸和调节压力绒毛尿囊膜起胚胎呼吸器官的功能，氧气的交换是在膜的血管内通过卵壳孔而进行的。尿囊腔胚胎的排泄器官，内含有尿囊液，初为透明液体，是单纯生理盐溶液，以后尿囊液中尿酸盐迅速增加，胚胎发育到第12-13天后，尿囊液开始变得混浊。羊膜与羊膜腔其中盛有羊水，胎体浸泡于其中卵黄在胚胎发育早期供给鸡胚营养。卵白在胚胎发育晚期供给鸡胚营养。最好是来自SPF鸡群，以降低母源抗体的影响01受精卵的壳最好是白色的02受精卵必须新鲜，保存在5-20℃不要超过10天，保存一个月的受精卵，孵化率将近于零。03四、受精卵的选择五、孵育孵卵箱内的温度应保持在37.5-38.5℃相对湿度：50%-60%必须保证具有充分的新鲜空气流通，特别是在孵化5-6天以后。从孵育后第3天开始，每天翻卵一次。01030204自孵育后的第4天开始检卵，每天一次。

孵育4-5日后即可于检卵灯上检查鸡胚受精与否及发育情况。未受精卵：只见模糊的卵黄阴影，不见血管和鸡胚痕迹。活胚：具有清晰的血管和鸡胚暗影，较大鸡胚还可见到胚动，但孵育14、15天以后胎动不明显，甚至无胎动。死胚：血管昏暗模糊，没有胚动。六、检卵01接种前处理02用检卵灯再次检查鸡胚活力，用铅笔画出气室和胚胎的位置，并在将要接种的部位做好记号。对鸡胚进行消毒绒毛尿囊膜接种01尿囊腔接种02卵黄囊接种03静脉接种蓝舌病毒04羊膜腔接种正粘病毒和副粘病毒05脑内接种狂犬病毒06眼球接种07八、接种途径（一）卵黄囊接种法

主要用于虫媒披膜病毒以及鹦鹉热衣原体和立克次氏体等的分离和增殖。

方法一：取6-8日龄鸡胚，用检卵灯照视画出气室和胚胎位置后，垂直放置在卵座上(大头向上)用碘酊和酒精消毒气室端用钢锥在气室中央锥一小孔。用注射器吸取病毒悬液，沿气室端所穿小孔垂直刺入3cm，注入病毒液。用熔化的石蜡封孔，置孵卵箱内继续孵育，每天翻卵1-2次，24h内死亡者废弃。A方法二：B2.同方法一C用熔化的石蜡封孔，置孵卵箱内继续孵育，24h内死亡者废弃。D将卵横放在卵座上，胚胎位置向下。在卵长径的1/2处用碘酊和酒精消毒。E用钢锥打一小孔，将针头刺入约1.5cm，注入病毒液。01绒毛尿囊膜接种02主要用于痘V和疱疹V的分离和增殖。03方法一：04取10-12日龄鸡胚，画出气室部，消毒。05在气室端的卵壳上开一1.5×1.5cm的口06用灭菌眼科镊子撕去一小片内壳膜07滴入接种物08用胶布或透明胶纸封闭切口在胚胎附近近气室处，选择血管较少的部位，用电烙器在卵壳上烙一个直径约3-4mm的烤焦圈。用碘酊和酒精消毒后，小心用刀尖撬起卵壳，造成卵窗。在气室端中央钻一个小孔。用针尖挑破卵窗中心的壳膜，切勿损伤其下的绒毛尿囊膜，滴加生理盐水于刺破处。02030401方法二：（做人工气室）用橡皮乳头紧贴于气室中央小孔上吸气，造成气室内负压，使卵窗部位的绒毛尿囊膜下陷而形成人工气室，此时可见滴于壳膜上的生理盐水迅速渗入。用1ml注射器滴2-3滴接种物于绒毛尿囊膜上。