氨基酸的薄层层析ppt课件.pptxVIP

如何分离鉴定氨基酸混合液？

生物化学与分子生物学实验教学中心

氨基酸的薄层层析

(Thinlayerchromatographyofaminoacids)

生物化学与分子生物学实验教学中心

实验目的

掌握薄层层析法的一般原理。

掌握氨基酸薄层层析法的基本操作技术。

掌握如何根据移动速率（Rf值）来鉴定被分离

的物质（即氨基酸混合液）。

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层析技术

概念：是利用化合物中各组分的物理性质的差

别（如溶解度、吸附能力、分子形状和大小、

分子极性等）使各组分在两相中的分布不同，

从而使各组分以不同速度随流动相向前移动而

达到分离的目的。

特点：分离效率高，能分离各种性质相类似的

物质。不仅可用于少量物质的分离纯分，也可

用于大量物质的分离纯化和制备。

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层析法的分类

气相层析（以气体为流动相的层析法）

液相层析（以液体为流动相的层析法，此为生物化学领

域里常用的方法）

1.吸附层析：薄层吸附层析、吸附柱层析

2.分配层析：纸层析、柱层析、薄层层析

3.离子交换层析

4.凝胶层析：柱层析、薄膜层析

5.亲和层析

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实验原理

1.薄层层析法是色谱分析技术的一种

一般是将固体吸附剂涂布在平板上形成薄层

作为固定相。当液相（展开溶剂）在固定相上流动时，

由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一样，不同氨基

酸在展开溶剂中的溶解度不一样，点在薄板上的混合

氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同，因而可以

彼此分开。（即通过吸附-解吸-再吸附-再解吸的反

复进行，而将样品各组分分离开来）

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实验材料

吸附剂：硅胶

粘合剂：0.5%的羧甲基纤维素钠

氨基酸的异丙醇溶液

丙氨酸、精氨酸、甘氨酸

展开-显色剂（正丁醇、乙酸、茚三酮溶液）

分析样品：氨基酸混合液

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器材

层析板、尺子、铅笔

烧杯、量筒

喷雾器、吹风机

毛细管、层析缸

药匙

烘烤箱

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0

9

年

秋

季

学

期

1、调浆称取硅胶3克，加0.5%的羧甲基纤维

素钠8毫升，调成均匀的糊状。

2、涂布取洁净的干燥玻璃板均匀涂层。

操作步骤

3、干燥将玻璃板水平放置，室—温下自然凉干。

薄层板的制备

4、活化70℃烘干30分钟。切断电源，待玻璃

板面温度下生降至不烫手时取出。

物

化

学

与

分

子

生

物

学

实

验

教

学

中

心

操作步骤—

点样

1、位置：用铅笔距底边

2cm水平线上均匀确定4个

点。每个样品间相距1cm。

2、用毛细管分别吸取氨

基酸溶液，轻轻接触薄层

表面点样。

3、加样后原点扩散直径

不超过2mm。

2cmAlaArgGlyMix

4、待点样点干后再重复

点一次。1cm

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操作步骤—

展层、显色

将薄层板点样端浸入展

层-显色剂，展层-显色剂液

面应低于点样线。盖好层析

缸盖，上行展层。当展层剂

前沿离薄板顶端2cm时，停

止展层，取出薄板，用铅笔

描出溶剂前沿界线，用热风

吹干或在85℃下烘干，即可AlaArgGlyMix

显出各层斑点。

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结果计算

斑点至原点距离

Rf溶=剂前缘至原点距离

小心量出斑点中心至原点中心距离，