H7N9亚型禽流感病毒变异株的分子特征及致病性研究.pdf

摘要

H7N9亚型禽流感病毒是一种新型流感病毒，可感染禽类和人类。自2017年9

月起我国在家禽中推行H7N9疫苗强制免疫政策，有效控制了H7N9禽流感病毒的流

行，家禽的感染率和发病率都显著降低，目前在家禽中呈现零星偶发的特点。但家禽

H7N9禽流感疫苗的全面使用增加了H7N9禽流感病毒演化的不确定性，具有“再发”

的风险。

本研究于2020～2021年期间对我国部分地区活禽交易市场及家禽养殖场采样并

进行H7N9病毒分离鉴定。在免疫鸡中分离出12株H7N9禽流感病毒，其中8株来

自云南，三株来自河北，一株来自山西。对这12株病毒进行全基因组序列分析结果

显示12株病毒的HA氨基酸序列分别为PEVPKRKRTAR↓GLF和

PEVPKRKRIAR↓GLF模式，现高致病性禽流感病毒分子特征。遗传演化分析显示12

株分离株处于同一进化分支，从进化模式上推测可能由2019年的北方变异毒株发展

而来，且云南株逐步演化为两个小分支。

挑选2株H7N9亚型禽流感病毒代表株对SPF鸡与BALB/c小鼠进行致病性研究。

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分别对4周龄SPF鸡和SPF级BALB/c小鼠以10EID50/200μL和10EID50/100μL的

病毒剂量进行人工感染。结果显示高致病性毒株YN1004和YN1008均可对SPF鸡

100％致死，其中YN1004株对SPF鸡的致病能力、水平传播能力强于YN1008株。

通过剖检和病理切片可以观察到死亡鸡的心脏、肝脏、脾脏都出现组织损伤。2株毒

株都可致死小鼠，小鼠的鼻甲骨与肺脏中病毒滴度较高，说明鼻甲骨和肺脏是变异株

在小鼠模型中主要的复制部位。

为评价分离株与疫苗株的抗原差异性，使用H7N9亚型禽流感疫苗株标准抗原和

标准阳性血清（rLN79、Re-3）与本研究毒株进行体外血凝抑制试验（HI），结果表

明本研究中的H7N9亚型禽流感变异株病毒与Re-3和rLN79抗血清具有显著抗原性

差异。为评价现有疫苗对云南毒株的保护效力，对SPF鸡进行免疫保护试验。选取

两种现有疫苗rLN79和Re-3分两组免疫4周龄SPF鸡三周，待抗体水平达到（8log～

2

6

10log）时再各分两组，共四组。Re-3免疫的两组以10EID/200μL的剂量攻毒

250

6

YN1004和YN1008两种代表性毒株，rLN79免疫的两组也以10EID50/200μL的剂量

攻毒YN1004和YN1008两种代表性毒株，进行免疫保护试验，攻毒后所有的鸡都表

I

现出临床症状，如精神沉郁、食欲减退、头部肿胀。攻毒后第1、3、5、7和9天

采集的咽拭子和泄殖腔拭子都能检测到病毒且每组鸡的存活率都低于60%。结果表明

rLN79、Re-3作为疫苗株不能完全阻止免疫鸡发病。本研究结果为家禽H7N9疫苗株

的更换和防控政策的实施提供了科学依据。

关键词：H7N9；遗传演化分析；致病性；免疫保护

II

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