研究生基因表达调控熊.ppt

5’3’CpG岛主要处于基因5’端调控区域。启动子区域的CpG岛一般是非甲基化状态的，其非甲基化状态对相关基因的转录是必须的。目前认为基因调控元件（如启动子）的CpG岛中发生5mC修饰会在空间上阻碍转录因子复合物与DNA的结合。因而DNA甲基化一般与基因沉默相关联。Rb基因CpG频率DNA甲基化一般与基因沉默相关联；非甲基化一般与基因的活化相关联；而去甲基化往往与一个沉默基因的重新激活相关联。DNA甲基化状态的遗传和保持：****DNA复制后，新合成链在DNMT1的作用下，以旧链为模板进行甲基化。（缺乏严格的精确性，95%）甲基化并非基因沉默的原因而是基因沉默的结果，其以某种机制识别沉默基因，后进行甲基化。DNA全新甲基化。引发因素可能包括：DNA本身的序列、成分和次级结构。RNA根据序列同源性可能靶定的区域。特定染色质蛋白、组蛋白修饰或相当有序的染色质结构。二、组蛋白修饰****组蛋白修饰是表观遗传研究的重要内容。组蛋白的N端是不稳定的、无一定组织的亚单位，其延伸至核小体以外，会受到不同的化学修饰，这种修饰往往与基因的表达调控密切相关。被组蛋白覆盖的基因如果要表达，首先要改变组蛋白的修饰状态，使其与DNA的结合由紧变松，这样靶基因才能与转录复合物相互作用。因此，组蛋白是重要的染色体结构维持单元和基因表达的负控制因子。严紧反应产生两种非正常的核酸堆积物[有时又称预警子(alarmone)]，即ppGpp和pppGpp，统称(P)PPGPP。产生的核酸堆积物A严紧因子RelA是一种(p)ppGpp合成酶，约与5%的核糖体结合在一起。B当A位被空载tRNA占据时，RelA被激活。C一个空载tRNA进入A位就生成一个(p)ppGpp(p)ppGpp的产生机制严紧反应机制：鸟苷四磷酸鸟苷五磷酸激活核糖体ReA蛋白（严紧因子）抑制rRNA基因表达核糖体蛋白与自身mRNA结合抑制其翻译氨基酸饥饿GTPGDP焦磷酸转移酶核糖体蛋白EF-TuEF-TspiGTPRecAATPAMPpppGppppGppGDPRecAATPAMPSpoT活性抑制GDPPPi严紧反应信号分子ppGpp和pppGpp产生机制(p)ppGpp的作用严紧反应使得rRNA和tRNA的合成量大幅减少（10-20%），一些mRNA的合成也减少（1/3）。蛋白质的降解速率增加，许多代谢调节作用开始发生。◆以操纵子模式调控原核生物基因表达调控:◆α因子识别启动序列决定基因表达◆存在阻遏蛋白负调控机制普遍存在◆主要在转录和翻译水平调控，其中转录阶段调控最有效．最经济．第五节真核生物基因表达的调控真核细胞染色体中包装的DNA处于转录抑制状态01真核基因调控以正性调控为主02转录起始涉及一套转录因子的参与03转录和翻译在时空上是分开的04与原核生物不同点核基因基因组大，通过利用各种转录因子正性激活RNA聚合酶是真核基因调控的主要机制。原因有二：

采用正性调节机制更有效；

采用负性调节不经济。转录与翻译分隔进行

转录与翻译过程分别存在于不同的亚细胞部位，可分别进行调控。正性调节占主导◆发育调控：调控真核细胞的生长发育分化的全部过程．◆瞬时调控：内外环境改变做出应答．真核细胞调控类型◆转录前的调控◆转录激活◆转录后加工与修饰◆翻译水平真核细胞调控水平（一）转录前的调控◆染色体水平◆染色质水平◆DNA水平染色体结构对转录的影响0102染色体水平:染色体重排染色质水平:活性染色质状态活性染色质特点(1)结构疏松(2)染色质构型发生改变:右旋转变左旋.(3)核心组蛋白发生化学修饰:乙酰化修饰甲基化,磷酸化修饰.(4)对DnaseⅠ超敏感对核酸酶敏感转录活跃区域对核酸酶敏感度增加DNA开放的松散结构使参与转录的RNA聚合酶和蛋白质转录因子能接近该区域，这些区域对DNaseⅠ敏感，称为DNaseⅠ高敏感点（hypersensitivesite）。这种高敏感点常出现在转录基因的5＇侧区（5＇flankingregion）、3＇末端，多在调控蛋白结合位点的附近，有利于调控蛋白的结合而促进转录。活化基因常有超敏位点，位于调节蛋白结合位点附近。组蛋白的作用组蛋白是碱性蛋白质，带正电荷，可与DNA链上带负电荷的磷酸基相结合，从而遮蔽了DNA分子，妨碍了转录，可能扮演了非特异性阻遏蛋白的作用；染色质中的非组蛋白成分具有组织细胞特异性，可能消除组蛋白的阻遏，起到特异性