生物化学蛋白质.ppt

（一）蛋白质的两性电离NH+3NH+3NH3PPPCOOHCOO-COO-蛋白质的阳离子蛋白质的兼性离子蛋白质的阴离子（等电点）+OH-+H++OH-+H+水化膜:带电物质在水中存在时形成的界限膜,有固定作用,使物质具有不能自由通透性,使蛋白不易沉淀蛋白质胶体的性质：粘度大扩散速率慢不能透过半透膜颗粒表面电荷水化膜稳定蛋白质亲水胶体性质的两个因素：CBA蛋白质的沉淀、变性、凝固Denaturation(变性)定义:蛋白质的特定空间构象被破坏,从而导致其理化性质改变和生物活性丧失,称蛋白质变性.5%55%30%10%溶解度降低生物活性丧失粘度增加，结晶能力消失容易被蛋白酶水解变性蛋白质理化性质：牛胰核糖核酸酶分子的变性与复性变性：蛋白质在一些理化因素的作用下，其正常的空间构象遭到破坏，主要是次级键或二硫键发生破坏，导致蛋白质的理化性质的改变（如溶解度下降、粘度增加）和生物学活性的丧失。蛋白质的变性不影响其一级结构。变性物理因素：加热、紫外线照射、超声、剧烈震荡等化学因素：强酸、强碱、有机溶剂、重金属盐等沉淀改变pH至pI破坏水溶液中蛋白质的水化膜和中和电荷（变性蛋白质）（蛋白质未变性）凝固加热（变性，不再溶解）变性不一定沉淀沉淀不一定变性凝固均变性并不溶解加热215酚试剂呈色反应（Lowrytest）：除蛋白质分子中肽键与碱性Cu2+发生二缩脲反应外，蛋合物（钼蓝）4剂中的磷钨酸和磷钼酸盐还原生成蓝色化3白质分子中的色氨酸与酪氨酸残基还将试A理化性质相应的分离纯化方法B分子大小和形态差速离心、超滤、分子筛、透析C溶解度盐析、萃取、分配层析、结晶D电荷差异电泳、等电聚焦电泳、离子交换层析E生物功能专一性亲和层析蛋白质的理化性质与常用的纯化方法A：根据蛋白质分子大小分离纯化蛋白质透析超滤（ultrafiltration）:在一定的压力下，使蛋白质溶液在通过一定孔径的超滤膜时，小分子量物质滤过，而大分子量的蛋白质被截留，从而达到分离纯化的目的。这种方法既可以纯化蛋白质，又可达到浓缩蛋白质溶液的目的。磁力搅拌器待超滤的蛋白质溶液加压的氮气超滤膜B：改变蛋白质溶解度分离蛋白质有机溶剂沉淀：降低溶液的介电常数，使蛋白质分子间相互吸引而沉淀；有机溶剂与水作用，不断压缩大分子表面水层，使相互凝结析出盐析：高浓度中性盐使蛋白质从溶液中析出有机溶剂沉淀：降低溶液的介电常数，使蛋白质分子间相互吸引而沉淀；有机溶剂与水作用，不断压缩大分子表面水层，使相互凝结析出C：根据蛋白质电荷性质的分离方法根据各种蛋白质在一定的pH环境下所带电荷种类与数量不同的特点，将不同蛋白质予以分离。常用的方法有：电泳离子交换层析等电聚焦电泳：带电物质在外加电场作用下向相反电极移动的现象原点带负电荷蛋白质的泳动方向滤纸、醋酸纤维素薄膜或其他支持物阳极阴极电极缓冲液电极缓冲液电泳示意图电泳（electrophoresis）：第三节蛋白质结构与功能的关系一、蛋白质一级结构与功能的关系（一）蛋白质一级结构与空间结构、功能的关系蛋白质一级结构的某些差异对其功能的影响(1)胰岛素一级结构与功能的关系(2)丝氨酸蛋白酶一级结构与功能的关系(3)镰刀细胞血红蛋白一级结构差别很大的蛋白质可能有相似的空间结构（二）蛋白质一级结构与物种进化的关系胰岛素的一级结构：A链由21个氨基酸残基组成;B链由30个氨基酸残基组成A链含一个链内二硫键A链与B链之间有二个二硫键Ser