生物化学蛋白质化学.ppt

4.有机溶剂沉淀法**与水互溶的有机溶剂，如酒精、甲醇等破坏蛋白质水化层，使得蛋白质沉淀。（在等电点下效果更好）01但是常温下，有机溶剂会引起蛋白质的变性，如酒精灭菌，而在低温下蛋白质变性减慢。因此利用有机溶剂沉淀蛋白质，为防止蛋白质变性，可在低温下进行，严格控制引起变性的各种因素。025.加热沉淀蛋白质**01020304蛋白质变性和沉淀是二个不同概念蛋白质变性不一定沉淀蛋白质沉淀也不一定变性加热使蛋白质变性沉淀五、蛋白质的呈色反应**蛋白质分子中某些氨基酸的侧链基团和肽键，可发生一些颜色反应。它们可用于某氨基酸的鉴定、蛋白质定性试验和定量测定。五、蛋白质的呈色反应**蛋白质的呈色反应就是氨基酸某些基团及肽键与一定试剂所产生的化学反应。利用这些反应，可对蛋白质进行定量测定。但是这些化合反应不是蛋白质的特征反应，在鉴定蛋白质时，除利用这些方法外，还必须结合蛋白质的其它性质考虑。1.双缩脲反应**蛋白质与碱性Cu2+形成紫红色络合物反应这是蛋白质分子中肽链的反应。肽链越多，反应颜色越深。氨基酸无此反应。可用于蛋白质定量、定性，也可用于蛋白质水解程度的测定福林试剂：磷钼酸-磷钨酸2.福林试剂反应（酚试剂反应）**在碱性条件下，蛋白质与硫酸铜发生反应01蛋白质-铜络合物，将福林试剂还原，产生磷钼蓝和磷钨蓝混合物023.乙醛酸反应**在蛋白质溶液中加入HCOCOOH，将浓硫酸沿管壁缓慢加入，不使相混，在液面交界处，即有紫色环形成。色氨酸的反应（吲哚环的反应）鉴定蛋白质中是否含有色氨酸4.茚三酮反应**在PH5.7时，蛋白质与茚三酮可产生颜色反应。可用于蛋白质的定性和定量。六、蛋白质的免疫学性质**抗原：指能刺激机体免疫系统产生免疫应答，并能与相应的抗体特异性结合的物质。01抗体：由相应抗原刺激机体的免疫系统而由β-淋巴细胞新产生的免疫球蛋白。换句话说，抗体是动物针对外来物质的出现而合成的一种蛋白质。02免疫反应：指抗原与抗体所引起的反应。03过敏反应：免疫反应拌有组织损伤或生理功能紊乱。04logo第五节蛋白质的提取、分离和纯化的基本原理蛋白质的分离纯化是研究其结构与功能的基础。在生物制药工业中，蛋白质、酶、多肽类激素等药物生产制备都涉及到蛋白质分离纯化的问题。蛋白质分离纯化的工艺过程，既要考虑尽可能的除去杂蛋白，又要保持目的蛋白的产量，也就是要提高回收率。一、提取**选材：新鲜、富含目的蛋白且来源方便组织细胞的粉碎：胞内及膜中蛋白物理法：如超声、匀浆、加砂研磨、高压挤压等化学法：如EDTA、SDS等酶法：如自溶法、外加酶法（纤维素酶、果胶酶、溶菌酶等）提取：适当溶媒、适当条件、适当提取时间和次数、溶菌酶处理（分解肽聚糖）或用表面活性剂处理。二、分离纯化**从组织细胞中提取的蛋白质溶液，含有许多不同分子量的蛋白质，要获取目的蛋白，须进一步分离纯化，将目的蛋白质与其它蛋白质分开。分离原理及原则：利用欲分离蛋白质的溶解度、分子大小、电荷、吸附性质、对配体分子的特殊的亲和力。从混杂蛋白质中分离出一个特殊蛋白质。生工学院生命科学系生工学院生命科学系蛋白质等离子点：在没有其它盐类干扰时，蛋白质质子供体基团解离出来的质子数与质子受体基团结合的质子数相等埋的pH称为。它是蛋白质的一个特征常数。当天然蛋白质受到外界各种理化因素的影响后，使其维系空间结构的次级键受到破坏，引起蛋白质天然构象改变，（使蛋白质分子从一种致密的状态变成松散的状态），从而使蛋白质的理化性质和生物活性改变或丧失，这种作用称为蛋白质的变性作用。（是一个协同过程，在某一条件下突然发生）亲水基团与疏水基团的比例，以及它们在蛋白质分子表面的排列以及由此而产生的偶极矩。盐溶：当浓度较低时，中性盐可以增加蛋白质的溶解度，这种现象称为盐溶。作用原理：**第四节蛋白质的理化性质及其应用一、蛋白质的两性解离和等到电点二、蛋白质的胶体性质三、蛋白质的变性作用四、蛋白质的沉淀作用五、蛋白质的呈色反应六、蛋白质的免疫学性质蛋白质分子的大小**蛋白质相对分子质量1万至几万..蛋白质相对分子质量的测定方法根据化学组成测定最低相对分子质量用物理化学方法来测蛋白质的相对分子质量一、蛋白质两性解离和等电点**蛋白质分子中氨基酸残基的侧链上存在游离的氨基和羧基，因此蛋白质与氨基酸一样具有两性解离性质，具有特定的等电点（pI）。溶液pH＝pI时，蛋白质所带正负电荷相等；pH＞pI时，蛋白质带净负电荷；pH＜pI时，蛋白质带净正电荷。主要由肽链中可解离的功能团决定蛋白质两性解离