生物化学试验基础.ppt

5)紫外-可见吸收光谱的应用紫外-可见吸收光谱除主要可用于物质的定量分析外，还可以用于物质的定性分析、纯度鉴定。2.2朗伯-比尔定律设入射光强度为I0，吸收光强度为Ia，透射光强度为It，则I0=Ia+It吸光度和透光度溶液的吸光定律透光率（透射比）Transmittance透光率定义：T取值为0.0%~100.0%全部吸收T=0.0%全部透射T=100.0%入射光I0透射光It添加标题吸光度:为透光度倒数的对数，用A表示A=lg1/T=-lgT=lgI0/It添加标题透光度：透光度为透过光的强度It与入射光强度I0之比，用T表示：即T=It/I0朗伯-比尔定律朗伯-比尔定律：当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比，即A=kcl式中比例常数k(吸光系数)与吸光物质的本性、入射光波长(单色光纯度)及温度等因素有关。c为吸光物质浓度，l为透光液层厚度。朗伯-比尔定律是紫外-可见分光光度法的理论基础。偏离朗伯-比耳定律的因素1（3）光程的不一致性。光源不是点光源，比色皿光径长度不一致，光学元件的缺陷引起的多次反射等，均造成光径不一致，从而与定律偏离。2（2）溶液的不均性。实际样品的混浊，加入的保护胶体，蒸馏水中的微生物，存在散射以及共振发射等，均可使吸光质点的吸光特性变化大。入射光为非单色光2.3紫外-可见分光光度计基本结构:光源→单色器→吸收池→检测器→信号显示系统↑样品组成部件检测器信号显示系统光源单色器吸收池生物化学实验商丘职业技术学院教务处第一节生物化学实验绪论掌握生物化学的基本知识、基本理论及基本实验技能；01掌握蛋白质、酶、核酸、糖等重要物质的分离、纯化和测定技术的原理及方法；03掌握分光光度计的使用、离心技术、电泳、层析等的原理和操作技能；02培养分析和解决问题能力以及严谨细致的科学作风、创新能力等综合素质。04教学目的2通过生物化学实验主要做到学习设计或验证一个试(实)验的基本思路，掌握各个实验的基本原理，学会严密地组织自己的实验，合理地安排实验步骤和时间。训练实验的动手能力，学会熟练地使用各种生物化学实验仪器。学会准确翔实地记录实验现象和数据的技能，提高实验报告的写作能力，能够科学、规范、清洁、整齐地进行所有的实验。掌握生物化学的各种基本实验方法和实验技能，为今后参加科研及技术工作打下坚实的基础。3实验记录实验中要详细记录实验条件，如使用的仪器型号、编号、生产厂家等；生物材料的来源、试剂的规格、试剂的浓度等。实验记录要注意有效数字，如吸光度值应为“0.050”，而不能记成“0.05”。每个结果都要尽可能重复观测二次以上，即使观测的数据相同或偏差很大，也都应如实记录，不得涂改。实验中应及时准确地记录所观察到的现象和测量的数据。4实验室规则生物化学实验不同于化学和生物学实验，而有其独特的实验技能和基本操作。课前必须认真预习，明确实验目的、原理、操作关键步骤及注意事项。要十分注意实验安全，未经实验指导老师允许不得开、关任何电源和仪器设备开关（按钮）。实验时应本着认真、积极的态度，在教师的指导下完成每次实验。注意观察实验过程中出现的现象和结果，并对实验结果展开讨论。结果不良时，必须重做。实验中，听从老师指导，严格遵守操作规程，取用试剂时，应仔细辨明标签，以免取错。取完试剂后，应及时将瓶盖盖好，放回原处，切忌乱拿乱放，“张冠李戴”。并应及时将实验结果和原始数据如实记录在实验报告上，按时写出实验报告。实验后，必须把仪器洗净放入仪器柜内；清扫实验台面、地面；试剂瓶要摆放整齐。要经常保持实验室内清洁，不乱丢纸屑及所有固体废弃物。自觉遵守课堂纪律，不迟到早退；保持室内安静；不高声谈笑。同学间应互助友爱。1234567)爱护实验器材，非本次实验使用的仪器设备未经老师允许不得乱动。本次实验必须使用的仪器设备，在了解仪器性能和操作规程之前，不得冒然使用，更不可擅自拆卸或将部件带出室外。实验过程中，如发现设备损坏或运转异常，应立即报告老师。8)实验室内严禁饮、食及吸烟!．对腐蚀性或易燃性试剂，操作时要格外小心。如酒精、乙醚等低沸点有机溶剂，使用时应禁明火，远离火源，若需加热要用水浴加热，不可直接在火上加热。用吸量管吸取试剂时应使用吸球，严禁用嘴吸取。对于有毒、腐蚀的试剂更应注意，应避免其直接接触人体及衣物。乙醚、丙酮等易燃试剂应远离火源，以免发生意外。9)注意实验室卫生、整洁。废弃液体应倒入水槽，放水冲走，有毒废弃物应放入废