生物样品前处理、制备、分离.ppt

透析*透析：膜分离技术的一种，仅让小分子扩散性的选择性的通过透过膜，把小分子从溶液中分离出去而保留生物大分子的技术。应用：常用于改换大分子溶液的盐成分，除去小分子，改变溶剂成分等。4.2透析用器材*透析用器材仅涉及透析膜：01常用有动物膜、羊皮纸、火棉胶、玻璃纸以及最近使用的赛璐玢膜都是用纤维或纤维素衍生物制成的。02透析膜的特点：03在溶剂中能膨胀形成分子筛状多孔膜，只允许小分子溶质和溶剂通过，而阻止大分子通过。04具有化学惰性，不具有能与溶质起作用的基团，在水、盐溶液、稀碱或稀酸中不溶解。05有一定的机械强度和良好的再生性。06透析膜的处理：*STEP5STEP4STEP3STEP2STEP1从成卷的透析膜中剪下适用的长度（一般20-30厘米）。用过量的10mmol/L碳酸氢钠湿润透析膜并煮沸几分钟。在10mmol/LNa2EDTA中煮沸几分钟，重复一次。也可在稍加搅拌下浸泡30分钟替代煮沸。用蒸馏水或超纯水清洗数次。置20%-50%乙醇溶液中，储存于4℃，以防能分解纤维素的微生物生长。注意事項：*操作时必需戴手套*1.取出透析袋要先用蒸餾水清洗乾淨，綁透析袋前要先試裝蒸餾水，看透析袋有沒有蛀孔，會不會有水噴出。綁透析袋不要太用力拉扯，否則透析袋可能會裂。2.一般透析至少要3h，至少要換兩次透析液(100至1000倍樣本體積)才能完全。3.注意離心濃縮管的離心轉速不能太快，否則薄膜很容易破裂。4.每次離心濃縮後，暫時不要丟掉外濾液(filtrate)，收集起來以防薄膜破裂流失。5.生物样品的浓缩*概念：从低浓度的溶液中除去水或溶剂使之变为高浓度溶液的过程。生物样品的制备，提取后往往先要进行浓缩，然后再进行干燥和结晶。利用亲水凝胶吸收溶液中的水分而得到浓溶液。离子交换法与吸附法是稀溶液通过离子交换柱或吸附柱，溶质被吸附后，再用少量液体洗脱、分部收集能使所需要物质的浓度提高几倍以至几十倍。方法：超滤法利用半透膜截流大分子，适于浓缩生物大分子。还有冷冻融化、加沉淀剂、溶剂萃取、亲和层析等方法也能达到浓缩的目的。我们只介绍蒸发浓缩。5.1蒸发*概念：溶液表面的水和溶剂分子获得的动能超过溶液内分子间的吸引力以后，脱离液面进入空间的过程。常压蒸发常用方法：减压蒸发5.1.1常压蒸发及常压蒸发装置*原理：在常压下加热使溶剂挥发，达到浓缩目的。所用装置为蒸发皿和玻璃蒸馏器。方法简单，适于浓缩耐热样品。0102035.1.2减压蒸发及减压蒸发装置*原理：通过减压使液面压力降低，而压力降低，沸点降低，蒸发速度加快。应用：适于浓缩不耐热的样品。、常用减压蒸发装置*1.减压加温蒸发器：在常压蒸发用蒸馏器上加真空泵。常用减压蒸发装置*旋转蒸发器：又称为旋转浓缩仪。它采用了旋转烧瓶，烧瓶由电机驱动缓慢旋转，液体在烧瓶内壁展开成膜溶剂得以迅速扩散蒸发，可防止溶液爆沸，蒸发率成倍提高。6.生物样品的干燥及器材*干燥：除掉潮湿的固体、膏状物、浓缩液和液体样品中的水分及溶剂的过程。目的：提高样品的稳定性，以供进一步的保存分析。方法：常压吸收干燥真空干燥冷冻干燥6.1常压吸收干燥器材*常压干燥是指在密闭的空间或干燥器内使用干燥剂进行的干燥。常用干燥剂及性能：*1.无水硫酸钠：中性，价廉，吸水量大，但作用慢，效力差。2.无水硫酸镁：中性，效力中等，作用快，吸水量大。3.无水硫酸钙：作用快，效率高。与有机物不发生反应，不溶于有机溶剂，缺点是吸水量小，可用于二次干燥。4.固体氢氧化钾（或钠）：可吸收水、氨和胺类。钾比钠的吸水能力大60-80倍。5.五氧化二磷：吸水、效力最高、作用非常快，但价格较贵。6.氧化钙：即生石灰，碱性，吸水后成为不溶的氢氧化物，价廉7.分子筛：泛指具有均一微孔而能选择的吸附直径小于其孔径的分子的那些吸附剂。如沸石分子筛，碳分子筛等，其中常用沸石分子筛。常用干燥剂及其作用*干燥剂吸收的溶剂或其他杂质无水Na2SO4、MgSO4、CaSO4、硅胶水CaO水、乙酸、氯化氢KOH、NaOH水、乙酸、氯化氢、酚、醇无水CaCl2、P2O5水、醇石蜡刨片醇、醚、石油醚、苯、甲苯、氯仿、四氯化碳6.2真空干燥*原理：在抽真空的容器中压力降低则溶剂的沸点也就降低，蒸发速度加快。01适用于干燥不耐热的样品。02实验室内常可利用的组合器材有：真空干燥器（箱）、冷凝管及真