经典液相色谱法.pptVIP

空间排阻色谱法*定义：利用某些凝胶对不同组分因分子大小不同而阻滞作用不同的差异而进行分离的方法实质：分子筛效应固定相：化学惰性多孔物质——凝胶分类：根据流动相的不同——以有机溶剂为流动相，称为凝胶渗透色谱法以水溶液为流动相，称为凝胶过滤色谱法液相色谱的固定相和流动相液相色谱的固定相和流动相*固定相的类型葡聚糖凝胶琼脂糖凝胶聚丙烯酰胺凝胶葡聚糖凝胶LH-20聚苯乙烯凝胶亲水性凝胶亲脂性凝胶聚酰胺柱色谱法02凝胶柱色谱法04经典液相柱色谱法05硅胶吸附柱色谱01离子交换柱色谱法03平面色谱法*231借用毛细作用的原理输送展开剂（流动相），色谱过程在平面上进行的方法。固定相成平面状态，试样溶液点于平面一端，在相对密闭的容器中展开（分离）后，根据组分在平面上移动的距离和浓度进行分析。常用有薄层色谱法和纸色谱法平面色谱法的定性参数平面色谱法*相对比移值(Rst)比移值Rf分离度（Rs）平面色谱法*比移值Rf在薄层色谱法中，用比移值Rf表示各组分在色谱中的保留行为Rf—表示物质色谱特性的参数，可用以定性分析平面色谱法*在给定条件下，Rf值为常数，其值在0～1之间Rf=0表示化合物在薄层上不随溶剂扩散移动，仍在原点位置Rf=1表示溶质不进入固定相，即表示溶质和溶剂同步移动一般要求Rf值0.2～0.8之间，最佳范围0.3～0.5平面色谱法*12543影响Rf值的因素：分离对象的化学结构固定相的组成及性质流动相的组成及性质介质的影响（包括实验室及展开箱的湿度、温度、饱和与否、上样量等等）12345平面色谱法*解决方法：由于Rf值重现性差，进行定性困难的问题，可以采用相对比移植Rst来定性。平面色谱法*试样中某组分的移动距离与参照物移动距离之比相对比移值(Rst)参照物另外加入的某一物质的纯品试样混合物中的某一组分RfVS.Rst取值范围不同:Rf值小于1，Rst值不一定小于1平面色谱法*l2、l1-原点至两斑点中心的距离d-两斑点中心间的距离W1、W2-两斑点的宽度分离度(Rs)两相邻斑点中心间距离与两斑点平均宽度（直径）的比值现行版《中国药典》规定薄层色谱法中：Rs1平面色谱法*薄层色谱法thinlayerchromatography，TLC固定相-均匀涂铺在具有光洁表面的玻璃、铝箔、塑料片或金属板上形成薄层流动相-展开剂分离过程-混合试样溶液置于薄层板一端确定位置（点样），在相对密闭容器中用适当的展开剂展开，通过物理或物理化学的方法观察组分斑点的移动距离，根据Rf或Rst及斑点大小进行定性定量分析的方法常用吸附剂硅胶200～300目硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254氧化铝碱性氧化铝、酸性氧化铝和中性氧化铝氧化铝H、氧化铝G和氧化铝HF254平面色谱法平面色谱法”展开剂及其选择一般原则：与吸附柱色谱法中选择流动相的原则相同主要根据：被分离物质的极性吸附剂的活性展开剂本身的极性点滴实验法12规律：平面色谱法*酸性组分-加入一定比例的酸，可防止斑点拖尾碱性物质-氧化铝为吸附剂，中性溶剂为展开剂硅胶为吸附剂，碱性展开剂；碱性较弱的生物碱可使用中性展开剂操作技术平面色谱法*选择01制板02点样03展开04检视05分析06平面色谱法*选择选板：玻璃板、塑料膜、金属铝箔表面光滑、平整清洁固定相（吸附剂）粘合剂：CMC-Na、煅石膏、淀粉等流动相（展开剂）显色剂平面色谱法*制板将吸附剂均匀地涂铺在玻璃板上使成薄层步骤：吸附剂的涂布板的活化平面色谱法*倾注法、平铺法、涂铺器、喷雾法硬板的涂铺方法：软板(不加粘合剂)→氧化铝硬板(加粘合剂)→硅胶吸附剂的涂布DCBAE2013.03-2013.06CMC-Na：羧甲基纤维素钠*第九章经典液相色谱法123经典液相柱色谱法液相色谱的固定相和流动相液相色谱法类型平面色谱法薄层扫描法简介本章要求掌握熟悉了解液相色谱技术的基本原理吸附等温线液相色谱技术的基本操作*液相色谱法类型LC以液体为流动相的色谱法称为液相色谱法LiquidChromatography定义液相色谱法类型*按分离效能分类经典液相现代液相按操作形式按分离机制液相色谱法类型*01常压下靠重力或毛细作