细菌内毒素检查法(凝胶法).pptVIP

细菌内毒素检查

（凝胶法）细菌内毒素检查法凝胶法方法分类 浊度法光度法显色基质法重现性好方法特性能定量能控制药物的增强/抑制干扰操作简便。节省时间原理：利用鲎血液中的变性细胞，经裂解液和机械方式促使细胞破裂而提取到的一种细胞溶解物，能与极微量的细菌内毒素形成特异凝胶反应，反应的速度和凝胶的坚固程度与内毒素浓度有关.01022017实验程序012018试验准备：试剂、仪器及用具022019内毒素限值的确定032020确定最大有效稀释倍数042021凝胶限度试验052022结果判定06细菌内毒素检测之凝胶法以最终产品为检测必要（浓度超过0.5mg/ml）01检测样品PH应在6~8之间，不符应调整02要求电热恒温水浴锅、定时钟、去热源枪头和小玻璃瓶、移液枪、试管架、剪刀、锡箔纸。试剂细菌内毒素工作标准品、细菌内毒素检查用水、鲎试剂。仪器与器具1、试验准备：试剂、仪器及用具2、内毒素限值的确定L=K/M式中L为供试品的细菌内毒素限值，一般以EU/ml、EU/mg或EU/U表示；K为人每千克体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/（kg·h）表示；M为人用每千克体重每小时的最大供试品剂量，以ml/（kg·h）、mg/（kg·h）或U/（kg·h）表示。一般由供试品提供者直接提供内毒素限值如1000EU。1（MVD）：MVD=cL/λ2式中L为供试品的细菌内毒素限值；c为供试品溶液的浓度；λ为在凝胶法中鲎试剂的标示灵敏度(EU/ml)。3、确定最大有效稀释倍数3、鲎试剂灵敏度复核logo按下表制备溶液A、B、C，使用稀释倍数为MVD的供试品溶液来制备溶液A，按鲎试剂灵敏度复核试验项下操作。BCAA鲎试剂200ul100ul100ul100ul标准品100ul供试品100ul100ul将制备好的试剂用锡箔纸包裹好后放入电热恒温水浴锅中，37℃恒温水浴60min后观察结果（保证玻璃瓶中溶液处于水面以下，并防止水进入瓶中）。若阴性对照溶液B为阴性，阳性对照溶液C为阳性，试验有效。1若溶液A的两个平行管均为阴性，判定供试品符合规定；若溶液A的两个平行管均为阳性，判定供试品不符合规定。若溶液A的两个平行管中的一管为阳性，另一管为阴性，需进行复试，复试时，溶液A需做4支平行管，若所有平行管均为阴性，判定供试品符合规定；否则判定供试品不符合规定26、结果判定