Djptpn11基因在日本三角涡虫(Dugesia japonica)整体及再生中的功能研究.pdf

摘要

日本三角涡虫（Dugesiajaponica）已经成为研究组织再生的优良动物模型，但其稳

态维持和再生的分子机制并不完全清楚。Ptpn11编码的SHP2蛋白，是一种蛋白酪氨酸

磷酸酶。SHP2参与细胞增殖、存活、分化和凋亡等细胞过程，并在癌症发生发展、胚

胎发育和炎症中发挥重要作用。目前为止，关于Djptpn11基因在涡虫中的功能尚不清楚。

本研究利用生物信息学、RNA干扰、整体原位杂交、整体荧光原位杂交、TUNEL分析、

转录组测序（RNA-seq）、免疫荧光及实时荧光定量（qRT-PCR）等分子生物学技术系统

研究了Djptpn11（SHP2）在涡虫整体稳态维持及再生中的功能，并探讨了其与RAS-ERK

信号通路的调控关系，研究结果如下：

（1）干扰Djptpn11对整体涡虫的影响：整体涡虫出现头部萎缩和身体肿胀，脑神

经萎缩，至第50天时虫体解体并死亡，涡虫避光及运动能力明显降低；早期创伤反应

基因（egr2和jun-1）、免疫相关基因（DjCTL和DjTRAF2）与细胞迁移相关基因（Djmmp、

Djb-integrin、Djsnail-1和Djzeb-1）表达呈现先上调后下调的趋势；干扰前期，整体涡

虫体内增殖干细胞数量及细胞增殖相关基因表达明显上调，干扰后期表达明显下调；全

能干细胞标记基因tspan-1表达变化不大，干细胞祖细胞组成发生变化，其中神经祖细

胞标记基因coe和原肾管标记基因pou2/3表达变化显著；涡虫体内细胞凋亡数量及凋亡

蛋白Caspase3表达显著升高，涡虫体内原肾管祖细胞及原肾管和纤毛相关标记基因表达

均显著下降。

（2）干扰Djptpn11对再生涡虫的影响：涡虫再生被抑制，再生片段不启动再生，

或再生出小头和小尾；再生涡虫神经生长受抑制，不能形成完整的神经系统；再生涡虫

中早期创伤反应基因（egr2、jun-1和runt1）、免疫相关基因DjCTL和位置控制基因（PCGs）

（Djwnt1和Djnotum）表达下调，前极和后极位置控制中心无法形成；再生涡虫体内增

殖干细胞数量明显减少且细胞迁移能力下降，大部分干细胞祖细胞标记基因（表皮、神

经、眼点、原肾管和咽祖细胞标记基因）表达下调；使用SHP2抑制剂SHP099处理整

体和再生涡虫后，观察到与Djptpn11干扰相似的现象。

（3）Djptpn11调控RAS-ERK通路：Djptpn11干扰后整体涡虫转录组测序数据显示

erk2表达量显著降低，ras上游的接头蛋白基因GRB2表达下调；进一步研究发现，

Djptpn11干扰后RAS-ERK信号通路的关键基因Djras、Djmek2和Djerk表达量显著降

低，同时RAS蛋白的表达量显著降低。

（4）干扰RAS-ERK信号通路关键基因Djras和Djmek2对整体涡虫的影响：与干

扰Djptpn11相似，整体涡虫头部耳突消失，头部萎缩和身体肿胀，整体涡虫头部神经出

现严重缺陷，后期虫体解体并死亡；对于早期创伤反应基因jun-1和egr2，在Djmek2

干扰后jun-1表达上调，而egr2表达变化不明显；Djras干扰后jun-1和egr2表达水平

没有明显变化；免疫相关基因DjCTL和DjTRAF2表达显著下调；整体涡虫体内增殖干

细胞数量明显降低，但细胞周期相关基因cyclinB1表达量显著升高与Djptpn11干扰整体

涡虫有相似趋势；全能干细胞标记基因tspan-1表达量显著下降，干细胞祖细胞（表皮、

神经、眼点和咽等祖细胞）标记基因表达发生明显变化，纤毛及原肾管部分标记分子

（CAVII-1、inx10和α-tubulin）表达量下降。

（5）干扰RAS-ERK信号通路关键基因Djras和Djmek对再生涡虫的影响：与干扰

Djptpn11相似，涡虫再生被抑制，再生片段不启动，或再生出小头和小尾；再生涡虫神

经系统生长受到抑制；再生涡虫细胞增殖及细胞凋亡水平均明显下降；RAS抑制剂

Kobe0065处理整体和再生涡虫观察到与Djras干扰相似的现象。

综上，干扰Djptpn11造成涡虫稳态紊乱和再生抑制，引起涡虫早期创伤反应基因、

免疫相关基因、干细胞、PCG基因和原肾管