LRRC15通过透明质酸通路促进特发性肺纤维化的作用研究.pdf

摘要

研究背景：特发性肺纤维化（IdiopathicPulmonaryFibrosis，IPF）是一种病

因不明，发病机制不明确的纤维化疾病，中位生存期在3-5年。LRRC15是一种

跨膜蛋白，属于LRRC超家族的成员，其结构具有特殊的15段富含亮氨酸重复

序列，与其同家族的成员通过其胞外富含亮氨酸重复序列与纤连蛋白、层粘连蛋

白和胶原在内的一系列细胞外基质（Extracellularmatrix，ECM）蛋白相互作用，

在细胞-细胞、细胞-基质之间起连接作用，以及在炎症，细胞粘附，信号转导，

DNA损伤修复中发挥重要作用，但是目前关于LRRC15在肺纤维化中的作用机

制仍不明确。

研究目的：前期研究发现，LRRC15在纤维化的肺组织中高表达，本研究以

博来霉素（Bleomycin，BLM）诱导的小鼠肺纤维化模型，上皮细胞（A549）和

成纤维细胞（MRC-5）损伤模型，从体内和体外水平探讨了LRRC15在肺纤维

化中的作用及其具体的调节机制，研究结果将为后续的临床研究提供技术支持和

实验材料，同时也可为IPF靶向药物的研发提供重要的理论基础。

研究方法和结果：首先，从GEO数据集中我们发现LRRC15在肺纤维化患

者肺组织中高表达。免疫荧光染色结果证实，BLM处理的小鼠肺组织中，LRRC15

的表达量显著增加，并且与成纤维细胞标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白（alphasmooth

muscleactin，α-SMA）以及上皮细胞标志蛋白SPC均有共定位现象。同时，在

HO诱导的肺泡上皮细胞(A549)以及TGF-β诱导的成纤维细胞(MRC-5)损伤中，

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LRRC15的表达量均明显增加。在此基础上，构建了LRRC15过表达质粒，结果

显示，LRRC15在上述两种细胞中表达量均极显著上调（p0.0001），可用于下

一步研究。为了探究LRRC15在肺纤维化中的作用，我们首先基因富集分析，

发现LRRC15与上皮间质转化（Epithelial-mesenchymaltransition，EMT）呈显

著正相关。进一步在A549细胞中通过qRT-PCR和Westernblot实验验证了过表

达LRRC15在转录和翻译水平上能明显抑制E-cadherin表达，促进Vimentin的

表达。Transwell实验证明，过表达LRRC15能够促进细胞迁移（p0.0001），

EdU实验以及CFU实验证明，过表达LRRC15能够显著促进细胞增殖（p0.001），

流式细胞术进一步检测发现，过表达LRRC15后，细胞凋亡比例明显增加

（p0.01）。在MRC-5细胞中：通过Westernblot以及qRT-PCR实验证明，LRRC15

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能够通过促进Fibronectin以及CollagenⅠ的表达造成细胞外基质沉积，胶收缩实

验证明LRRC15能够明显促进成纤维细胞激活。

为了进一步探究LRRC15在肺纤维化中的作用机制，首先通过qRT-PCR和

Westernblot实验检测了透明质酸结合蛋白2（Hyaluronanbindingprotein2，

HABP2）、透明质酸合成酶2（Hyaluronsynthase2，HAS2）、CD44以及CD168

等与透明质酸合成和转运相关分子的表达变化。结果表明，过表达LRRC15能

够促进上述分子在mRNA以及蛋白水平的表达水平增加。而联合使用透明质酸

合成抑制剂4-甲基伞形酮(4-Methylumbelliferone,4-MU)在转录和翻译水平均能

够显著抑制LRRC15引起的HABP2、HAS2、CD44、CD168以及细胞外基质成

分Fibronectin、CollagenⅠ的表达水平升高。上述结果进一步证实，LRRC15通

过促进透明质酸合成及转运，进而诱导成纤维细胞的活化以及细胞外基质的沉积。

研究结论：在肺纤维化过程中，LRRC15能够促进在上皮细胞的迁移、增殖、

凋亡以及上皮-间质转化，能够诱导成纤维细胞中透明质酸的胞内合成和胞外转

运及降解，导致成纤维细胞活化和ECM的沉积，最终促进肺纤维化的进程。

关键词：LRRC15；特发性肺纤维化；C57BL/6小鼠；博来霉素；A549细胞；

MRC-5细胞；透明质酸

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