MRPL11通过调节线粒体稳态对特发性肺纤维化的作用机制研究.pdf

摘要

特发性肺纤维化（IPF）是一种与常见间质性肺炎的组织病理学模式相关的独特的

IPF

临床实体。病理上，以炎症、成纤维细胞增殖和胶原沉积为特征，目前最普遍的焦

点是纤维化形成和异常伤口愈合的概念。IPF的发病原因尚不明确，其诱发因素主要包

括遗传、环境（吸烟）、药物和衰老等。目前研究表明肺泡上皮损伤是一个关键的诱发

因素，而线粒体在其中发挥着重要的作用。当细胞长期暴露在环境压力下，如香烟烟雾

等环境毒素，线粒体的数量、生物发生、周转和代谢就会发生适应性变化，这些变化促

进了肺的失修和纤维化。线粒体核糖体蛋白大亚基11（MRPL11）是一种线粒体蛋白，

是哺乳动物线粒体大亚基的组成部分，主要参与电子传递链（ETC）的翻译和表达，被

认为是癌症的重要预后指标。已有研究表明MRPL11除了参与蛋白质合成外，还可以通

过氧化磷酸化系统介导有氧能量转换，影响各种肿瘤的病理生理过程。然而，MRPL11

在肺纤维化中的作用尚未被探索。本文旨在研究MRPL11对肺纤维化的影响。

本文首先通过IPF样本数据库分析MRPL11的表达变化。通过分析发现Mrpl11在

IPFBLM

患者的血液样本中的表达显著降低。博来霉素（）诱导的肺纤维化小鼠肺组织

切片的免疫组化和免疫荧光验证了上述结果。采用WesternBlot、RT-qPCR技术检测小

BLMHOA549MRPL11

鼠模型肺组织匀浆以及和22诱导的细胞损伤模型中的表达变化。

证实了MRPL11在肺纤维化中发挥着重要作用。接下来，我们设计合成MRPL11的干

A549WesternBlotRT-qPCRCCK8EduCFU

涉片段瞬时转染细胞，通过、、、、、伤口愈

合实验、Transwell实验、流式细胞术和免疫荧光等技术，探究沉默MRPL11对肺纤维

化的影响。实验结果表明，沉默MRPL11抑制了A549细胞中E-cadherin、α-SMA和Col1a1

的表达，抑制了A549细胞活性、增殖、凋亡、集落形成、迁移和侵袭，但对细胞周期

无显著影响。这些结果表明沉默MRPL11具有一定的促纤维化作用。为了进一步研究这

一作用的机制，通过WesternBlot、RT-qPCR检测沉默MRPL11处理的A549细胞中由

核基因编码的线粒体呼吸链亚基COXIV和由线粒体基因编码的MTCOX2的表达，结果

表明COXIV稳定表达，而MTCOX2的表达显著降低。进一步，通过Seahorse检测细

胞的氧化磷酸化水平,结果表明沉默MRPL11显著抑制了细胞呼吸。用钙离子检测试剂

盒检测细胞内钙离子水平，发现沉默MRPL11使细胞内钙离子水平显著增加。JC-1和

I

ROS试剂盒检测细胞的MMP和细胞内活性氧水平，发现沉默MRPL11使线粒体膜电位

下降，细胞内活性氧增加。以上的结果表明，沉默MRPL11抑制了线粒体的稳态。为了

WesternBlotFISOPA1

进一步了解线粒体的形态变化，检测分裂蛋白（）和融合蛋白（、

MFN1、MFN2）和免疫荧光检测了线粒体的形态，结果显示，沉默MRPL11抑制了线

粒体正常分裂，改变了线粒体的动力学。

为了探究MRPL11表达的减少是如何影响线粒体进而影响纤维化的，通过Western

Blot、RT-qPCR检测沉默MRPL11处理的A549细胞中UPRmt相关的基因（ATF5、HSP60、

mtHSP70HSP10NRF2/KEAP1

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