综合讲解纤维素酶.pptVIP

中科院微生物研究所董志扬等用康宁木霉通过γ射线照射和亚硝基胍交替处理，诱变出一株纤维素酶高产菌株T801，其产酶能力提高1.77倍。青岛海洋大学管斌等对里氏木霉进行低剂量、反复多次紫外线、亚硝基胍复合诱变处理方法，用“以2-脱氧葡萄糖作为降解产物阻遏物”高效筛选方法，选育得到一株抗分解代谢阻遏的突变株，纤维素酶活力提高三倍。β-葡萄糖苷酶：βGI，βGII05等纤维素酶中各组分蛋白分子量，氨基酸残基组成，基因长度与序列均已被调查清楚。06内切酶：EGI、EGIII和EGV基因03外切酶：CBHI,CBHII，0420世纪80年代以后一直至今，以纤维素酶过量生产为主要目的，构建高产纤维素酶基因工程菌的研究十分活跃。01目前里氏木霉(Treesei)纤维素酶中的02纤维素酶基因工程菌构建纤维素酶基因工程菌构建策略由于纤维素酶是一个多酶体系，要得到一个有实际应用价值的纤维素酶，大多采用产纤维素酶菌种Trichodermareesei为外源基因的表达宿主，采用基因工程手段改造里氏木霉，提高产酶活力。通过扩增内切酶或外切酶蛋白基因的拷贝数，外源β-葡萄糖苷基因转入到里氏木霉引入高比活的外源内切酶或外切酶基因，强化内切酶或外切酶的活性，可获得改变纤维素酶系组成和高活性的纤维素酶工程菌。如01国内某公司利用采用厌氧真菌Orpinomyces的高比活（220U/mg）内切纤维素酶基因CelB，转入到里氏木霉中，筛选高产菌株，发酵CMCase酶活达到400-1200IU/ml。02诺维信公司把米曲霉的β-葡萄糖苷基因转入到里氏木霉RutC-30，得到高β-葡萄糖苷酶活性表达量的里氏木霉SMA135-04，该纤维素酶有利于对纤维素的水解。03浙江大学化工与生物工程系，采用里氏木霉TrichodermareeseiZU-02，提取木糖后的玉米芯残渣为碳源，最适底物浓度为研究了40g/l，最适C/N比为8.0，500ml三角瓶摇瓶发酵7天，纤维素酶活力为5.25IU/ml(213.4IU/gcellulose)，放大到30吨搅拌发酵罐，4天发酵，酶活达到5.48IU/ml(222.8IU/gcellulase)。10%(w/v)玉米芯残渣，用20IU/g底物加酶量,，水解率达到90.4%江南大学利用里氏木霉Trichodermareesei高产突变株WX12，以纤维素粉、麸皮和豆粕为原料，30℃发酵，CMCase达到600IU/ml，滤纸酶活FPase达到17IU/ml。河南天冠企业集团采用里氏木霉R3液体深层发酵，发酵过程采取分段控制pH值、温度和溶氧的工艺,发酵120h酶活力最高,FPA和CMC酶活力分别达到48.9IU/ml和321.68IU/ml。0102美国能源部、国家再生能源实验室（NREL）总投资超过3000万元美元，与和杰能科GENENCOR、诺维信NOVOZYMES公司合作研发的生物基乙醇燃料项目中降低纤维素酶成本,提高酶活已取得了可喜的成果，采用生物信息、直接进化等生物技术，将生产1加仑燃料级酒精所需纤维素酶的成本从最初超过5美元的水平降至仅需要耗费约10-18美分（实验室条件下），降低了约30倍的成本。欧洲和美国最大酒精制造商之一AbengoaBioenergy公司已于2006年在位于美国内布拉斯加州的生物废料分馏处理中试基地对诺维信酶制剂工艺进行测试。一旦实现该项目的商业化操作，将有助于减少对不可再生、基于石油的能源和原材料资源的依赖。纤维素酶的发酵生产方法1、液体发酵：机械搅拌罐发酵（分批发酵，流加发酵）气升式罐发酵优点：液体发酵原料利用率高、生产条件易控制、产量高、工人劳动强度小、产品质量稳定、品质高，容易大规模生产。缺点：设备投资大、要求高；发酵动力消耗大。2、固体发酵：固体发酵反应器有转鼓式、圆盘式、浅盘式等。一般来说固体发酵产酶活力是液体发酵酶活力的几十到几百倍。如采用周期脉冲技术，可改善传质、传热，提高产酶活力。优点：设备投资相对较小、发酵动力消耗小，酶活高，产量高。缺点：不容易大规模生产，产品品质不高，劳动强度较高；气升式液体发酵转鼓式固体发酵构建纤维素酶高产基因工程菌，或现有生产菌种通过基因工程技术改造。0102纤维素酶的蛋白质工程，纤维素酶的人工进化，创造比活性更高、酶水解温度高，水解效率更强的纤维素酶。纤维素酶的研究发展趋向表1、国产、国外液体纤维素酶产品活力比较来源CMCase(IU/ml)FPase(IU/ml)国内某公司13475.240.3国内某公司21320.622.