地黄对重金属镉胁迫的耐性研究.pdf

摘要

地黄（RehmanniaglutinosaLiboch）隶属玄参科地黄属，是我国传统中药材，常

以块根入药。近年来，以根部入药的药用植物常会因土壤污染特别是重金属污染问题

而影响到药用植物的品质及药用成分含量。多数植物的重金属吸收转运和积累机制十

分复杂，一般根部比叶片、茎、果实等地上部分积累更多的重金属，且由于物种和生

长环境的不同，植物面对重金属胁迫的响应机制也会发生变化。ABC转运蛋白家族作

为最大的转运蛋白家族之一，在植物重金属耐性机制中有重要的作用。本研究以地黄

为研究材料，基于蛋白组学和转录组数据，挖掘并初步分析了ABC转运蛋白家族基因，

同时，探究了地黄镉胁迫下地黄幼苗的生理响应情况，具体研究结果如下：

1、构建地黄伸长期、膨大期和成熟期根的iTRAQ差异蛋白库，对地黄逆境胁迫

应答蛋白进行分析，共鉴定到1573个逆境胁迫响应蛋白，共富集到305个生物过程，

171种细胞组分，富集到339种分子功能。鉴定到响应胁迫的基因1067个，其中差异

蛋白表达，响应非生物胁迫的基因610个，响应化学刺激的基因660个；响应镉胁迫

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的基因个。还分别在膨大期伸长期比较组、成熟期伸长期比较组和成熟期膨大

期比较组中分别鉴定出镉胁迫响应差异表达蛋白30、31、18个。

2、对地黄幼苗进行重金属镉的急性胁迫处理，研究发现了地黄叶绿素含量呈现低

促高抑的趋势，说明高浓度的镉胁迫会扰乱植物光合作用。渗透调节物质可溶性糖和

脯氨酸的含量在镉浓度在10-40mM时升幅较小，在最高镉处理浓度下可溶性糖含量和

脯氨酸含量显著增加。

3、在镉胁迫条件下，地黄CAT、SOD、POD中对于镉胁迫反应最快的酶是CAT，

CdCATSOD

这说明地黄幼苗在遭受胁迫时是最先发挥作用的抗氧化酶，地黄中和

POD则在更高浓度处理下对由镉胁迫引起的氧化应激作出反应。

4、挖掘、筛选了地黄镉响应基因RgABCF3、RgABCG14、RgABCG21、

RgABCG22RgABCG25RgABCG36

、、。这些基因在地黄组织中的表达无明显特异性，

但对镉胁迫都有明显响应。ABCF3蛋白定位在细胞质和细胞核，ABCG21蛋白定位在

叶绿体与细胞质中，ABCG14、ABCG22、ABCG25、ABCG36蛋白均定位在细胞膜。

I

5、构建了1300super-RgABCF3、1300super-RgABCG14、1300super-RgABCG21、

1300super-RgABCG22、1300super-RgABCG25重组质粒并通过花序浸染法转入野生型

拟南芥并得到转基因拟南芥纯合种子；通过农杆菌侵染法将重组质粒转入地黄获得过

表达地黄植株以备后续功能验证。

关键词：地黄，蛋白组学，镉胁迫，ABC转运蛋白，遗传转化

II

ABSTRACT

RehmanniaglutinosaLibochbelongstothegenusRehmanniainScrophulariaceae.Itisa

traditionalChinesemedicinalmaterialinChinaanditsRoottubersareoftenusedasmedicine.Inrecent

years,medicinalplantsthatuserootsasmedicineoftenaffectthequalityandsafetyofmedicinalplantsdue

tosoilpollution,especiallyheavymetalpollu