细胞总RNA提取及逆转录.pptVIP

（1）吸头的安装要紧密：（2）吸取液体前，先打到第一挡：第一挡为实际读数体积，第二挡为帮助彻底打出液体，避免吸头内液体残留。（3）将吸头插入液面下，不易过深或过浅：（4）缓慢松开拇指，吸取液体。（5）完全放开拇指后，吸头在液面下停留一下（约半秒钟）：（6）抬起加样器，观察吸头外壁上是否挂有液体。将外壁液体用容器口引流回容器：尤其国产吸头容易沾附液体。（7）将液体匀速打到目的容器内，加样器推到第二挡：速度不易过快。（8）取下加样器头，放到废物盒内。如果需要吸取相同液体，吸头没有被其他试剂污染，可不换吸头。按箭头所示，讲解离心机使用程序：分子生物学实验1、每组同学做一份实验；2、遵守实验室规则，穿白衣；3、同学们在听课时要作好记录;4、上课时间。～欢迎大家参加分生实验课的学习！2013年五年制实验课考试形式实验成绩考核占总成绩15%。每次实验报告5分含随堂测试，共三次，合15分。缺实验课成绩者，本课程不予通过。【每名同学的3个实验报告放在一起，最后一次实验课交。学生交卷后签名。教师按学号排卷。】1.加样器2.离心机先介绍本轮实验中两种常用仪器的使用方法3、根据取样量，选择合适量程的加样器。顶部标记加样器的最大量程，分别为：20?l:0.5~20?l100?l:20~100?l1000?l:200~1000?l?一、加样器的使用及注意事项1、用途——微量吸取液体2、每组3支加样器Q：如果要吸取5μl、50μl、150μl、500μl的液体，应选择哪个加样器?单击此处可添加副标题4、如何调节？首先观察目前的读数,假设为050:最大量程为20?l的加样器—5?l最大量程为100?l的加样器—50?l最大量程为1000?l的加样器—500?l顺时针调节---读数变小逆时针调节---读数变大注意：调节前，加样器读数正处于最大量程或最小量程时，如果向错误方向调节，马上会超出量程，将会损害加样器的精度。练习：加样器读数为100，实际体积各为多少?5、加样器使用步骤：1）选择加样器,观察读数,调节读数。安装吸头要紧密(不要用手直接拿吸头)，安装后旋转固定一下。2）在液面外，先按到第一挡。3）将吸头插入液面下的适当深度:过深可能会腐蚀加样器,过浅可能会吸入空气。4）缓慢松开拇指,吸取液体。完全放开拇指后，停留半秒钟。急于离开液面，易吸入空气。5）抬起加样器,估计体积是否正确,将外壁液体用容器口引流回去6）贴容器内壁，加样器推到第二挡将液体匀速打出。(吸头内有液体时，不能将加样器平放或倒置，液体会倒流损坏加样器！)7)观察吸头内液体是否完全打出，将吸头弃于废物盒内。第一挡为实际读数体积，第二挡为帮助彻底打出液体，避免吸头内液体残留。二、离心机的使用及注意事项打开电源离心管中的液体为2/3,盖紧盖子,防止离心机被腐蚀。1代表转速盘上方的数据，2代表下方的数据。将样品标记好并配平,对称放入离心机（管的连接处朝外）。设定离心的转速和时间。统一离心。TeamWork实验一、细胞总RNA的提取及逆转录实验内容：小鼠肝脏组织总RNA的提取RNA的变性琼脂糖凝胶电泳以总RNA为模板的逆转录反应一、真核细胞的总RNA1、mRNA:1-5%5`鸟嘌呤7位甲基化—CH3修饰。1）免受核酸酶破坏，2）起始、促进蛋白质合成。3`poly(A)尾巴结构20--200个A.翻译所必需。起始密码：AUG终止密码：UAA,UAG,UGA。2、tRNA:10-15%3、rRNA:80-85%大亚基60S:28S=4718nt5S=120nt5.8S=160nt小亚基40S:18S=1874nt第一步：提取小鼠肝脏组织的RNA二、RNA提取的注意事项RNA分离的关键因素：避免RNA酶的污染。RNA酶：广泛存在：灰尘、人体