酵母核糖核酸的分离及组分鉴定.ppt

酵母核糖核酸的分离及组分鉴定目的与要求1.了解稀碱法提取RNA的原理、方法2.掌握核酸中三大组分的鉴定方法010203核糖核酸RNA：从细胞核和细胞质中分离出来的化学物质。在蛋白质合成和其他生化反应中起着重要作用，RNA的结构和DNA的结构类似，都是由核苷酸按照一定顺序排列成的长链。RNA可以分为信使RNA、转运RNA、核糖体RNA以及其他类型的RNA。原理碱基磷酸戊糖酵母菌单细胞真菌酵母中主要成分是RNA（2.67～10.0%)，DNA很少(0.03～0.516%)。RNA组分鉴定:硫酸可使RNA水解，再分别鉴定3总RNA的提取:1采用稀碱裂解法，乙醇沉淀RNA,洗涤除杂质；2墨绿色2核糖的鉴定——苔黑酚(3,5—二羟基甲苯)法1碱基的鉴定——嘌呤碱嘌呤碱+过量浓氨水+AgNO3絮状嘌呤银化合物磷酸的测定——定磷法(NH4)2MoO4+H2SO4H2MoO4+(NH4)2SO4H3PO4+12H2MoO4H3P(Mo3O10)4+12H2O+12H2OH3P(Mo3O10)4Mo2O3MoO3(钼蓝）试剂和器材试剂：0.04MNaOH；酸性乙醇溶液,95%乙醇1.5M硫酸；浓氨水，0.1M硝酸银；三氯化铁浓盐溶液,苔黑酚乙醇；定磷试剂器材研钵，天平；沸水浴，低速台式离心机。材料干酵母015g酵母中加入30ml0.04MNaOH，在研钵中研磨均匀，转入大试管，沸水浴20min，3000转离心10min，取上清，弃沉淀。02上清液慢慢倾入10ml酸性乙醇中，边加边搅，静置沉淀RNA后，3000转离心3min，弃上清，取沉淀。一.提取步骤改动：将沉淀用95%乙醇洗两次，约3毫升/管，用于除去表面杂质。第一次将沉淀捣散后再3000转离心3min；第二次将沉淀捣散过滤，旨在将沉淀誊出来，放在滤纸上凉干，称量。（差减法称量，滤纸应提前称好）将所有提取物转移到小三角瓶/大试管中，加适量1.5M硫酸进行水解，再分别鉴定组份。鉴定磷组分可适当增加，效果更好。氨水过量太多也会使沉淀消失；先加硝酸银后加氨水效果明显。苔黑酚显色的特异性较差，凡戊糖都有此反应。准微量DNA无影响，较多DNA存在，亦有干扰。12二.鉴定