大肠杆菌MG1655代谢模型的重构及1,4-丁二胺代谢调控机理的研究.pdf

摘要

1,4-PolyamidePA

丁二胺（又称腐胺）是一种重要的生物胺，是合成聚酰胺（，）

46PA46PA4FPA410

（）和、等重要工业塑料的单体材料，广泛应用于制造电工电子、

1,4-

汽车配件等领域。目前丁二胺生产主要是化学合成法，需要依赖石油这种不可再

生资源，反应条件苛刻且对环境不友好。微生物发酵法生产1,4-丁二胺利用可再生资

源且更加环保，是未来的发展趋势。目前1,4-丁二胺生物合成的研究已经取得了很大

的进展，但缺乏对1,4-丁二胺生物合成调控的全局研究。本研究旨在重构大肠杆菌基

1,4-1,4-

因组尺度的代谢网络模型，阐明丁二胺代谢调控机制，为构建高产丁二胺的

1,4-

大肠杆菌工程菌株和发酵合成丁二胺提供理论指导。

基于大肠杆菌MG1655的最新基因组代谢模型iML1515、数据库及参考文献等，

新添加了部分基因特别是与1,4-丁二胺生物合成有关的基因，构建了MG1655的基因

组代谢模型iLE1575。包含1575个基因、2778反应和1942个代谢物。并利用10种

不同碳氮的进行模拟与实验，初步验证了模型的有效性。

iLE1575MG16551,4-

根据模型，对关于丁二胺的生物合成进行了生理功能和调

1MG1655195

控规律解析。（）以葡萄糖为碳源时，有个必需基因（占模型总基因的

12.4%2

），占比最大的两个子系统是辅因子和维生素代谢和氨基酸代谢；（）分析目标

产物和生长量之前的耦合关系，当生长量稳定于0.2-0.4/h最有利于1,4-丁二胺的生成。

（3）利用通量平衡分析对不同碳氮源对合成1,4-丁二胺途径进行代谢流分析，预测结

果表明山梨醇为碳源时，流向合成1,4-丁二胺的碳通量要明显高于葡萄糖为碳源；（4）

191,4-

分析外源添加种氨基酸对生物量和丁二胺产量的影响，结果表明添加谷氨酸、

1,4-5NDPK5

谷氨酰胺、精氨酸、脯氨酸能够提高丁二胺产量。（）根据模型的预测，敲除、

DURIPPPAPSR2PFKDURIK1SUCOASPROt2rpp7CS

、、、、、等个基因和过表达、

PFK、ICDHyr、ACODA、ACOTA、ACGK、THD2pp、GLUDy、ACGK、AGPR、PDH、

PFL、ARGORNt7pp、ORNDC、ACGS、PPC等15个基因有利于提高1,4-丁二胺的产

量。构建了基因敲除菌株J-1、J-2、J-3、J-4、J-5和基因过表达菌株J-6、J-7、J-8对

预测结果进行验证。

J-41,4-MG165566.6%

结果表明：敲除菌株的丁二胺产量较野生型相比提高了，

J-4