血清学实验技术.pptVIP

试管法为一种定量试验，用已知抗原以检测待测血清中是否存在相应抗体和测定该抗体的含量，以协助临床诊断或供流行病学调查。试管凝集试验（二）间接凝集试验正向间接凝集试验（检测抗体）、反向间接凝集试验（检测抗原）

间接凝集抑制试验、协同凝集试验抗球蛋白实验（三）Coombs实验机体受某些抗原刺激后，可产生不完全抗体，由于这种抗体体积较小、长度短，只能与颗粒抗原一方相结合(又称单价抗体)，因而不能出现肉眼可见的凝集反应。抗原表位被不完全抗体封闭（封闭抗体）。不完全抗体免疫异种动物可获得抗球蛋白抗体（抗抗体），抗抗体与抗原颗粒上吸附的不完全抗体结合，产生凝集反应。直接Coombs试验:用于检测已粘附在红细胞表面的不完全抗体。间接Coombs试验:用于检测游离在血清中的不完全抗体二、沉淀反应概念：可溶性抗原与相应抗体结合，在有电解质存在下，形成肉眼可见的沉淀现象。

细菌的外毒素、内毒素、菌体裂解液、病毒、血清、组织浸出液等。2、种类

（1）液相沉淀试验：絮状沉淀试验、环状沉淀试验、免疫浊度测定

（2）凝胶沉淀试验：免疫扩散试验（单向单扩、单向双扩、双向单扩、双向双扩/琼扩）、免疫电泳、对流免疫电泳、火箭免疫电泳Ag为阳性；②Ag为弱阳性；③Ag为强阳性；④Ag为强阳性对流免疫电泳三、免疫标记技术抗原与抗体结合了，但复合物小，不能通过凝集或沉淀用肉眼观察到。定义：将抗原-抗体反应与标记技术相结合，用放射性同位素、酶或荧光素标记的已知抗体或抗原，通过检测标记物，间接测定未知的抗原或抗体。检测标记物的存在，间接反映抗原抗体发生了结合。抗原抗体反应的特异性标记分子的敏感性分类：放射免疫测定法：131I，32P免疫荧光技术：FITC，PE免疫酶测定法：HRP，AP免疫酶测定法

(EnzymeImmunoAssay,EIA)用酶标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应。辣根过氧化物酶(HRP)，碱性磷酸酶(AP)特点：高度特异性：保持抗原抗体反应的特异性高灵敏度：酶催化底物显色的高效性，pg水平微量检测定性定量检测：反应液颜色深浅或光密度值分类：酶联免疫吸附试验：可溶性抗原或抗体酶免疫组化法：组织中或细胞表面的抗原。酶联免疫吸附试验

(Enzyme-LinkedImmunoSorbentAssay,ELISA)用酶标记抗原或抗体检测液体（血液、细胞液）中未知抗体或抗原的方法。1.定义2.分类间接法（IndirectELISA）：将已知抗原吸附于固相载体，酶标记二抗检测液相中未知抗体双抗体夹心法（SandwichELISA)：将已知抗体吸附于固相载体，酶标记一抗检测液相中的可溶性抗原竞争法（CompetitiveELISA)：将已知抗体或抗原吸附于固相载体，酶标记抗原或抗体检测液相中的可溶性抗原或抗体酶联免疫吸附试验

(Enzyme-LinkedImmunoSorbentAssay,ELISA)3.原理（以间接性ELISA为例）：显色四、补体结合反应补体结合反应：是指在补体的参与下，以绵羊红细胞（SRBC）和溶血素（抗SRBC的抗体）作为指示系统的抗原抗体反应。指示系统：绵羊红细胞和溶血素。补体:仅供一组Ag-Ab系统反应的定量补体。待检系统：已知Ag或Ab、待检Ab或AgCBA补反中包括两个系统五种成分：原理：1：NoAb；2：Ab待测系统抗原+未知血清12补体12Step1抗原抗体复合物的形成Step2补体的结合和耗竭指示系统SRBC+抗SRBC抗体Step3SRBC的裂解12酶反应的最大特点是：高效性，一个酶分子可以结合多个底物分子，发挥酶解作用。因此，将酶连接在实验所需的抗体中，可以对抗原抗体反应有一种放大的效应，具有高灵敏度的特点酶联免疫吸附试验属于免疫酶技术的一种根据标记对象和检测对象的不同，可以分为多种类型，以其中一种来介绍这种方法的基本原理i：首先以已知抗原包被酶标板，吸附一定时间后，洗涤未结合的可溶性抗原成分。在吸附有抗原的酶标板中，加入待测血清，孵育一定时间，使待测血清中的特异性抗体与包被抗原充分反应、结合，之后充分洗涤未与抗原结合的游离抗体成分。在吸附有抗原抗体复合物的酶标板中，加入针对待测抗体来源种属的酶标二抗（即若待测血清来自人，那么应加入抗人的二抗。免疫球蛋白的免疫原性可以分为同种型、同种异型和独特型，其中同种型抗原决定簇存在于CH和CL区，因此，以某一种属的IgG免疫另一种属，可以获得针对该种属所有IgG的特异性结合的抗体，由于是针对抗体的抗体，将其称之为二抗。在这个试验