原创力文档- 1、本文档共16页，可阅读全部内容。
- 2、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 6、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
SP9-KF载体构建报告
一．构建方案：
二．构建概要：
1．SP9-KF的BAC-EL250的鉴定，同时也对的BAC做个鉴定。
2．BACLOXP元件（BAC-LOXP）。
3．BAC-LOXP中ZEO元件（BAC-LOXP-ZEO）。
4．PL253套取载体套取BAC-LOXP-ZEO（PL253-SP9-LOXP-ZEO）。
5．PL253-SP9-LOXP-ZEO转化araEL350，去除neo（PL253-SP9-ZEO-LOXPpopout）。
6．PL253-SP9-ZEO-LOXPpopout做Gateway反应，得到终载体（SP9-Gateway）。
7．终载体SP9-Gatewaypopout验证并。
三．具体构建过程
1．BAC转化EL250后的PCR验证
订购了2个BAC:BMQ-366A07和BMQ-377K12，设计如图
两个BAC同时转化EL250,鉴定如下：
BMQ-366A07（1-6号）和BMQ-377K12（a-d号），下同。
SP9-KF-H1F:
ATAAGAATGCGGCCGCGCGATCGCGGTTTCCTAGTGATGCAGTAAAC
SP9-KF-H1R:
AATAATTGCCCAAATAGGGAGAAGttaattaaACCAGCCCTGAGTTCAAATAGAT
PCRLength：498bp
DL2000:20000bp,1000bp,750bp,500bp,250bp
SP9-KF-H2F:CTTCTCCCTATTTGGGCAATTATT
SP9-KF-H2R:GGACTAGTCGCAATGGGCCTGTTCTGACTTAC
PCRLength：507bp
KT246和KT247引物用来鉴定菌种EL250。
图中的BAC既是订购的BAC划单克隆挑菌提质粒用来作对照。
2．元件LOXP和ZEO
1）取验证正确的A07BAC-EL250
文档评论（0）