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单克隆抗体动物细胞培养手册

目录

第一章细胞培养的基本原理与技术2

第二章细胞培养液9

第三章细胞培养的基本方法30

第四章大规模培养技术56

第五章常见组细胞的培养方法80

第六章肿瘤细胞的培养88

第一章细胞培养的基本原理与技术

现代生物技术一般认为包括基因工程技术、细胞工程技术、酶

工程技术和发酵工程技术，而这些技术的发展几乎都与细胞培养有

密切关系，特别是在医药领域的发展，细胞培养更具有特殊的作用

和价值。比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多是通过细

胞培养来实现的。基因工程乙肝疫苗很多是以CHO细胞作为载体;

细胞工程中更是离不细胞培养，杂交瘤单克隆抗体，完全是通过细

胞培养来实现的，既使是现在飞速发展的基因工程抗体也离不开细

胞培养。正在倍受重视的基因治疗、体细胞治疗也要经过细胞培养

过程才能实现，发酵工程和酶工程有的也与细胞培养密切相关。总

之，细胞培养在整个生物技术产业的发展中起到了很关键的核心作

用。

第一节体外培养的概念

一、基本概念体外培养（invitroculture）,就是将活体结构成分或

活的个体从体内或其寄生体内取出，放在类似于体内生存环境的体

外环境中，让其生长和发育的方法。

•组培养：是指从生物体内取出活的组（多指组块）在体外进

行培养的方法。

•细胞培养：是指将活细胞（尤其是分散的细胞）在体外进行培养的

方法。

•器官培养：是指从生物体内取出的器官（一般是胚胎器官）、器官

的一部分或器官原基在体外进行培养的方法。

二、体内、外细胞的差异和分化

1.差异：细胞离体后，失去了神经体液的调节和细胞间的相互影响，

生活在缺乏动态平衡相对稳定环境中，日久天长，易发生如下变化：

分化现象减弱；形态功能趋于单一化或生存一定时间后衰退死亡；

或发生转化获得不死性，变成可无限生长的连续细胞系或恶性细胞

系。因此，培养中的细胞可视为一种在特定的条件下的细胞群体，

它们既保持着与体内细胞相同的基本结构和功能，也有一些不同于

体内细胞的性状。实际上从细胞一旦被于体外培养后，这种差异

就开始发生了。

2.分化：体外培养的细胞分化能力并未完全丧失，只是环境的改变，

细胞分化的表现和在体内不同。细胞是否表现分化，关键在于是否存

在使细胞分化的条件，如Friend细胞（小鼠红白血病细胞）在一定

的因素作用下可以合成血红蛋白，血管内皮细胞在类似基膜物质底

物上培养时能长成血管状结构，杂交瘤细胞能产生特异的单克隆抗

体，这些均属于细胞分化行为。

第二节细胞培养的一般过程

一、准备工作准备工作对开展细胞培养异常重要，工作量也较大，

应给予足够的重视，推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或

无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基

与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，

培养箱及其他仪器的检查与调试。

二、取材在无菌环境下从机体取出某种组织细胞视（实验目的而定）,

经过一定的处理（如消化分散细胞、分离等）后接入培养器血中，

这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机

体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。

理论上讲各种动物和人体内的所有组织都可以用于培养，实际上幼

体组织（尤其是胚胎组织）比成年个体的组织容易培养，分化程度

低的组织比分化高的容易培养，肿瘤组织比正常组织容易培养。取

材后应立即处理，尽快培养，因故不能马上培养时，可将组织块切

成黄豆般大的小块，4c的培养液中保存。取组织时应严格保持无

菌，同时也要避免接触其他的有害物质。取病理组织和皮肤及消化

道上皮细胞时容易带菌，为减少污染可用抗菌素处理。将取得的

组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。如系组织