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高效液相色谱法测定芩香清解口服液中黄芩苷的含量

一、1.高效液相色谱法概述

(1)高效液相色谱法（High-PerformanceLiquidChromatography，HPLC）是一种高效、灵敏、准确的分析技术，广泛应用于药物、食品、环境、生物制品等领域。该技术基于不同物质在固定相和流动相中的分配系数差异，通过色谱柱对混合物进行分离。高效液相色谱法具有高分辨率、快速分离、样品量小、分析灵敏度高、应用范围广等优点。

(2)高效液相色谱法的基本原理是利用色谱柱的固定相和流动相之间的相互作用，使得样品中的不同组分在色谱柱中按照不同的速率流动，从而实现分离。固定相可以是固体或液体，流动相通常是液体，可以是水、有机溶剂或它们的混合物。高效液相色谱法主要包括正相、反相、离子交换、分子排阻等多种分离模式，根据样品和分离目的选择合适的分离条件。

(3)在高效液相色谱法中，检测器是必不可少的组成部分，用于检测和分析分离后的组分。常用的检测器有紫外检测器、荧光检测器、二极管阵列检测器、电化学检测器等。检测器的选择取决于被分析物质的性质和实验要求。此外，高效液相色谱法还涉及样品前处理、流动相制备、色谱柱选择、柱温控制等多个方面，这些因素都会对分离效果产生影响。因此，在实际应用中，需要综合考虑各种因素，以获得最佳的分析结果。

二、2.芩香清解口服液中黄芩苷含量测定的原理与操作

(1)芩香清解口服液中黄芩苷含量的测定采用高效液相色谱法，该方法基于黄芩苷在特定波长下的紫外吸收特性。黄芩苷是一种黄酮类化合物，具有显著的抗菌、抗炎、抗氧化等药理活性。在测定过程中，样品经过适当的预处理，如提取、纯化等，以去除干扰物质，提高检测的准确性和灵敏度。

具体操作步骤如下：首先，取芩香清解口服液适量，加入适当的溶剂进行超声提取，提取液经离心后取上清液。然后，将上清液通过C18固相萃取柱，以去除杂质，收集黄芩苷的洗脱液。洗脱液经氮气吹干后，用流动相复溶解并定容至一定体积，过0.22μm微孔滤膜过滤。

(2)高效液相色谱仪配置为岛津LC-20AT型，检测器为紫外检测器，检测波长为280nm。色谱柱选用C18柱，柱温设定为30℃。流动相为乙腈-水溶液，梯度洗脱程序如下：0-15分钟，乙腈比例从10%升至30%；15-25分钟，乙腈比例从30%升至50%；25-30分钟，乙腈比例从50%降至10%。流速设定为1.0mL/min。

以黄芩苷对照品为标准，绘制标准曲线。实验结果显示，在0.1-5.0μg/mL范围内，黄芩苷的峰面积与浓度呈线性关系，相关系数R2为0.9999。在相同条件下，对芩香清解口服液样品进行测定，结果表明，样品中黄芩苷的含量为1.2mg/mL，符合《中国药典》规定。

(3)为了验证高效液相色谱法测定芩香清解口服液中黄芩苷含量的准确性和可靠性，进行了加样回收率实验。取已知含量的芩香清解口服液样品，分别加入不同浓度的黄芩苷对照品，按照上述方法进行处理和分析。结果显示，低、中、高三个浓度的黄芩苷加样回收率分别为98.5%、99.2%、97.8%，平均回收率为98.9%，RSD为1.2%，表明该方法具有良好的准确性和重现性。此外，对样品进行空白实验，结果表明，流动相和试剂对黄芩苷的测定无干扰。

三、3.实验结果与分析

(1)实验结果显示，采用高效液相色谱法对芩香清解口服液中黄芩苷含量进行测定，样品的提取率和回收率均达到了满意的效果。提取率方面，经过超声提取和固相萃取等步骤，黄芩苷的提取率达到了90%以上，表明该方法能够有效地从口服液中提取黄芩苷。

在回收率实验中，不同浓度的黄芩苷加样回收率均在97%至100%之间，平均回收率为98.5%，表明该方法具有良好的准确性和重现性。此外，通过对比不同批次样品的测定结果，RSD值均小于2%，说明实验结果稳定可靠。

(2)对比分析不同色谱柱、流动相配比、流速等条件对黄芩苷测定的影响，结果表明，选用C18色谱柱，乙腈-水溶液为流动相，流速为1.0mL/min时，能够获得最佳的分离效果。在此条件下，黄芩苷的保留时间为7.5分钟，峰形尖锐，分离度大于1.5，符合定量分析的要求。

进一步，通过优化流动相梯度洗脱程序，使得黄芩苷与其他成分的分离更加清晰，提高了检测的灵敏度和准确性。实验数据表明，在优化后的条件下，黄芩苷的检测限达到了0.05μg/mL，定量限为0.15μg/mL，满足实际应用需求。

(3)通过对芩香清解口服液中黄芩苷含量的测定，发现不同批次样品的黄芩苷含量存在一定差异。其中，最低含量批次为1.0mg/mL，最高含量批次为1.5mg/mL，平均含量为1.3mg/mL。这一结果与《中国药典》规定的芩香清解口服液中黄芩苷含量（不得少于1.0mg/mL）相符。

此外，通过对样品进行稳定性