昆虫病原细菌的利用.ppt

①ICP基因的命名1981年Schnepf从HD-1中克隆到了第1个ICP基因。1998年Crickmore依据ICP基因的核苷酸序列及其演化关系，将ICP基因分为4级。2009年8月，ICP基因按照核苷酸序列的同源性已被分为cry1-cry59,cyt1和cyt2共61类，487个，其中cry基因460个，cyt基因27个。第37页,共62页，星期六，2024年，5月②ICP的三维结构及功能ICP中最先获得三维结构的是鞘翅目昆虫特异性毒素蛋白Cry3A，接着又获得鳞翅目昆虫特异性毒素蛋白Cry1Aa的三维结构。结构域Ⅰ：由8个α螺旋组成，与细胞膜插入及孔隙形成有关；结构域Ⅱ：由3个β折叠片和2个短的α螺旋组成，与昆虫上皮细胞表面毒素受体的结合有关；结构域Ⅲ：由2个β折叠片形成一个面对面的β夹层结构，具有毒素的稳定性、特异性与结合有关。第38页,共62页，星期六，2024年，5月（2）营养期杀虫蛋白（Vegetativeinsecticidalprotein，VIP）是专指营养期表达的杀虫蛋白。具有热不稳定性的可溶蛋白，95℃处理20min便失去活性。2009年8月，有65个vip基因被鉴定分离。VIP由vip1、vip2、vip3三种基因编码，杀虫活性各不相同，且在氨基酸序列的进化上与ICP没有任何同源性。第39页,共62页，星期六，2024年，5月Vip3A以可溶性蛋白的形式存在于害虫中肠，与中肠上皮细胞上的受体结合，形成稳定的离子通道，破坏中肠形成孔洞，造成昆虫死亡。对夜蛾科害虫具有广谱的杀虫活性。一些对Bt杀虫晶体蛋白有很强抗性的昆虫对Vip3A都较为敏感，如Vip3A对小地老虎的毒性要比Cry1Ac高260多倍。第40页,共62页，星期六，2024年，5月（3）β-外毒素（苏云金素thuringiensin）是Bt在生产阶段产生的一种热稳定（121℃处理15min，杀虫毒力不降低）、低分子量（701kDa）腺嘌呤核苷酸衍生物，主要存在于Bt血清型H1菌株中。它是一种胞外因子，对蝇类毒力高，称为“蝇因子”或“蝇毒素”；对紫外线稳定。杀虫谱较杀虫晶体蛋白广，对线虫、螨类均有毒杀作用。主要通过抑制RNA聚合酶的活性阻断RNA合成导致昆虫死亡，因而对人类和动物有一定毒性。第41页,共62页，星期六，2024年，5月（4）双效菌素（zwittermiciaA）即ZwA因子，是在Bt和蜡质芽孢杆菌Bacilluscereus(Bc)中发现的一种线形氨基多元醇类化合物。可溶于水，碱性条件下易水解，对热敏感。可抑制子囊菌、担子菌的生长。虽然其杀虫活性低，但对Bt的其他杀虫活性物质具增效作用，特别是与许多ICP混用时，不但具高的增效作用，还可减缓害虫的抗性。双效菌素化学结构简单，可以人工合成，具有很好的开发利用前景。第42页,共62页，星期六，2024年，5月2、苏云金杆菌致病机理苏云金杆菌对昆虫的致病作用主要是通过昆虫食入菌剂而引起的。菌剂包括芽孢和细菌所产生的毒素。菌体本身的繁殖可导致害虫的死亡，而昆虫能在短时间内死亡往往是苏云金杆菌产生的毒素所致。苏云金杆菌对多种昆虫能引起发病而致死，但对另一些昆虫则致病力很差，甚至没有作用。第43页,共62页，星期六，2024年，5月ICP的致病机理首先溶解在昆虫的中肠中，ICP被昆虫的中肠蛋白酶加工成有活性的毒素；随后被激活的ICP结合到中肠上皮细胞的刷状缘膜上的特异受体上；最后ICP与受体结合从而引起毒素构象变化，并使之能够融合到中肠膜上，使膜形成孔隙和离子通道，导致昆虫死亡。昆虫对ICP抗性的产生往往就是因为受体结构的改变。第44页,共62页，星期六，2024年，5月WhalonandWinge,2003第45页,共62页，星期六，2024年，5月（三）Bt内毒素的利用1、含Bt内毒素新菌株的利用从20世纪80年代中后期开始，利用DNA重组技术对毒素基因进行改造，构建综合性能优良的重组菌株已成为国外各大生物农药公司的目标，目前已有10余种遗传重组杀虫剂被批准进行后期田间试验。通过构建重组菌株可以实现以下目标：●（1）扩大杀虫谱；●（2）延长杀虫毒素的持效期及改进释放性能；●（3）提高毒力和杀虫晶体蛋白的产量。第46页,共62页，星期六，2024年，5月2、含Bt内毒素的转基因作物的利用1981年，Schnepf等人首次成功地克隆了第一个编码Bt杀虫晶体蛋白基因，揭开了利用基因工程培育抗虫植物的序幕。目前全世界总共已获得了50多种转Bt杀虫晶体蛋白基因植物，其中以双子叶植物居多，而单子叶植物由于其遗传转化较困