有效成分的分离与精制四86课件讲解.pptx

1有效成分的分离与精制四

2薄层层析法应用①化学成分的预试②化学成分的鉴定③探索柱层分离的条件

3①化学成分的预试用薄层层析法进行中草药化学成分预试，可依据各类成分性质及熟知的条件，有针对性地进行。由于在薄层上展层后，可将一些杂质分离，选择性高，可使预试结果更为可靠。

4②化学成分的鉴定以薄层层析法进中草药化学成分鉴定，最好要有标准样品进行共薄层层析。如用数种溶剂展层后，标准品和鉴定品的Rf值、斑点形状颜色都完全相同，则可作初步结论是同一化合物。但一般需进行化学反应或红外光谱等一种仪器分析方法加以核对。

5③探索柱层分离的条件在进行柱层分离时，首先考虑选用何种吸附剂与洗脱剂。在洗脱过程中各个成分将按何种顺序被洗脱，每一洗脱液中是否为单一成分或混合体，均可由薄层的分离得到判断与检验。通过薄层的预分离，还可以了解多组分样品的组成与相对含量。如在薄层上摸索到比较满意的分离条件，即可将此条件用于干柱层析。

63、制备薄层色谱（PTLC）一种是流动相靠毛细管作用力流经固定相（传统的制备型薄层薄层色谱），另一些方法是流动相靠外力强制流动，如离心薄层色谱和加压薄层色谱。

73、制备薄层色谱（PTLC）吸附剂硅胶是最常用的吸附剂。上样量与吸附剂的厚度有关。上样上样是进行PTLC分离的一个最关键的步骤。上样前先用样品溶于少量溶剂，低挥发性溶剂可引起点样带变宽，因此最好选用挥发性溶剂（如己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯等）。样品浓度应在5%-10%左右。点样带应尽可能狭窄，以获得更好的分离效果。点样可用手工进行或自动点样仪。展开剂的选择及展开在进行PTLC之前应用分析型TLC预试验来确定展开剂。被分离物质的回收

83、吸附柱色谱（柱层析）⑴吸附剂的用量一般为样品量的30～60倍。样品极性较小、难以分离者，吸附剂用量可适当提高到样品量的100～200倍。据此可选择适当规格的色谱管，实验室中常用色谱管的规格如下所示，其高度与直径比（h/d）约为（15∶1）～（20：1）。柱色谱用的硅胶及氧化铝通常以100～200目或200～300目为宜，或甚至直接采用薄层色谱用规格，其分离效果可以大大提高。

94、吸附柱色谱⑵洗脱剂的选择，以TLC摸索洗脱条件装柱，湿法装柱（以起始洗脱剂拌匀装柱）或干法装柱

104、吸附柱色谱（3）样品的预处理能直接溶于洗脱剂的样品用适量洗脱剂溶解样品，尽可能少，以利样品在吸附剂柱上形成狭窄的原始谱带。不能溶解于洗脱剂的样品，则将用能使之溶解的溶剂溶解后，再用少量吸附剂拌匀，并减压抽干溶剂或在60℃下加热挥尽溶剂，置真空干燥器中减压干燥或直接减压抽干、研粉后再小心铺在吸附剂柱上。

114、吸附柱色谱（4）洗脱用溶剂的极性宜逐步增加，跳跃不能太大。实践中多用混合溶剂，并通过巧妙调节比例以改变极性，达到梯度洗脱分离物质的目的。一般混合溶剂中强极性溶剂的影响比较突出，故不可随意将极性差别很大的两种溶剂组合在一起使用。实验室中最常应用的混合溶剂组合如下：

12吸附柱色谱常用混合洗脱溶剂己烷-苯极苯-乙醚苯-乙酸乙酯性氯仿-乙醚氯仿-乙酸乙酯递氯仿-甲醇丙酮-水增甲醇-水

134、吸附柱色谱（5）为避免发生化学吸附，酸性物质宜用硅胶、碱性物质则宜用氧化铝进行分离。硅胶、氧化铝用适当方法处理成中性时，情况会有所缓解。通常在分离酸性（或碱性）物质时，洗脱溶剂中分别加入适量醋酸（或氨、吡啶、二乙胺），常可收到防止拖尾、促进分离的效果。

145、聚酰胺吸附色谱法聚酰胺（poliamide）吸附属于氢键吸附，是一种用途十分广泛的分离方法，极性物质与非极性物质均可适用，但特别适合分离酚类、醌类、黄酮类化合物。

15（1）聚酰胺的吸附原理系通过分子中的酰胺羰基与酚类、黄酮类化合物的酚羟基，或酰胺键上的游离胺基与醌类、脂肪羧酸上的羰基形成氢键缔合而产生吸附。至于吸附强弱则取决于各种化合物与之形成氢键的能力。

16⑵聚酰胺的吸附原理在含水溶剂中大致有以下规律：①形成氢键的基团数目越多，则吸附能力越强。②成键位置对吸附力也有影响。易形成分子内氢键者，其在聚酰胺上的吸附即相应减弱。③分子中芳香化程度高者，则吸附性增强；反之，则减弱。

17⑵聚酰胺的吸附原理吸附因为是在溶液中进行，故溶剂也会参加吸附剂表面的争夺，或通过改变聚酰胺对溶质的氢键结合能力而影响吸附过程。聚酰胺与酚类或醌类等化合物形成氢键缔合的能力在水中最强，在含水醇中则随醇浓度的增高而相应减弱，在高浓度醇或其它有机溶剂中则几乎不缔合。故在聚酰胺柱色谱分离时，通常用水装柱，样品也尽可能作成水溶液上柱以利聚酰胺对溶质的充分吸附，随后用不同浓度的含水醇洗脱，并不断提高醇的浓度，逐步增强从柱上洗脱物质的能力。

18⑵聚酰胺