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超高效液相色谱-大体积流通池荧光法检测奶及奶制品中的黄曲霉毒素M1

一、1.背景介绍

(1)黄曲霉毒素（Aflatoxins，AFs）是一类由某些曲霉菌和青霉菌产生的次生代谢产物，广泛存在于各种粮食、饲料和食品中。其中，黄曲霉毒素M1（AFM1）是黄曲霉毒素B1（AFB1）在动物体内代谢的主要产物，具有极强的毒性和致癌性。AFM1的摄入量与人类肝癌等恶性肿瘤的发病率密切相关。据世界卫生组织（WHO）和国际癌症研究机构（IARC）的研究报告显示，AFB1和AFM1是已知的致癌物质，对人类健康构成严重威胁。

(2)随着全球食品产业链的日益复杂化，食品安全问题日益凸显。AFM1污染已成为全球性的食品安全问题之一。据统计，全球每年约有1/3的粮食受到AFs的污染，尤其在发展中国家，AFM1污染问题更为严重。例如，我国是世界上最大的粮食生产国和消费国，每年因AFM1污染导致的粮食损失达数百万吨，给国家和人民健康带来巨大风险。

(3)为了保障食品安全，各国政府和国际组织对AFM1的检测方法进行了深入研究。目前，AFM1的检测方法主要包括薄层色谱法（TLC）、高效液相色谱法（HPLC）、液相色谱-质谱联用法（LC-MS）等。其中，超高效液相色谱-大体积流通池荧光法（UHPLC-FLD）因其灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，已成为AFM1检测的重要手段。近年来，随着分析技术的不断发展，UHPLC-FLD检测AFM1的方法已广泛应用于食品、饲料和农产品等领域，为保障食品安全提供了有力技术支撑。例如，我国《食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素M1的测定》（GB5009.268-2016）规定了UHPLC-FLD法作为AFM1的检测方法，并要求对婴幼儿配方食品、乳制品等高风险食品进行严格检测。

二、2.超高效液相色谱-大体积流通池荧光法原理

(1)超高效液相色谱-大体积流通池荧光法（UHPLC-FLD）是一种高效、灵敏的检测技术，主要用于分析复杂样品中的痕量物质。该方法结合了超高效液相色谱（UHPLC）的高分离效率和荧光检测器（FLD）的高灵敏度，能够实现快速、准确的分析。UHPLC采用高压泵提供高速流动相，使样品在短柱上快速分离，从而提高分析速度和灵敏度。

(2)大体积流通池（MacrovolumeFlowCell）是UHPLC-FLD系统的关键部件之一，它能够容纳更多的流动相，减少样品和流动相的消耗，提高检测灵敏度。在UHPLC-FLD系统中，AFM1等目标物质在流动相中被携带通过色谱柱，通过色谱柱的分离，目标物质与其他组分实现分离。分离后的目标物质进入荧光检测器，荧光检测器通过检测目标物质的荧光信号来定量分析。

(3)荧光检测器利用荧光物质在特定波长下的荧光特性来检测目标物质。在UHPLC-FLD系统中，AFM1等目标物质在激发光照射下，会发出荧光。通过测定荧光强度和激发、发射波长，可以实现对AFM1等目标物质的定量分析。UHPLC-FLD法在检测AFM1时，具有检测限低、线性范围宽、重现性好等特点，是当前检测AFM1的有效方法之一。

三、3.样品前处理方法

(1)样品前处理是超高效液相色谱-大体积流通池荧光法检测AFM1的关键步骤之一。在奶及奶制品中检测AFM1时，通常采用液-液萃取法（LLE）和固相萃取法（SPE）进行样品前处理。液-液萃取法通过选择合适的溶剂将AFM1从样品中提取出来，然后通过蒸发去除溶剂，得到浓缩的AFM1提取物。例如，使用正己烷和乙酸乙酯的混合溶剂，AFM1的提取效率可达90%以上。

(2)固相萃取法是另一种常用的样品前处理方法，其原理是利用固相萃取柱上的吸附剂对目标物质的特异性吸附，从而实现分离和净化。在奶及奶制品中检测AFM1时，常用的固相萃取柱材料有C18、Oasis等。例如，使用OasisHLB固相萃取柱对AFM1进行提取，AFM1的回收率可达85%以上。样品前处理过程中，添加适量的内标物质可以进一步提高检测结果的准确性和重现性。

(3)在实际应用中，针对不同类型的奶及奶制品，样品前处理方法可能会有所不同。例如，对于牛奶和乳制品，可以先进行离心去除脂肪，然后采用上述提到的液-液萃取或固相萃取方法进行AFM1的提取。对于含有较高脂肪的奶制品，可能需要使用酸性溶液进行预处理，以降低脂肪对提取效率的影响。在样品前处理过程中，还需注意样品的储存条件，以防止AFM1的降解或污染。例如，对于液态样品，应置于4℃冰箱中保存，避免反复冻融。

四、4.检测方法及条件优化

(1)在超高效液相色谱-大体积流通池荧光法检测奶及奶制品中的黄曲霉毒素M1（AFM1）时，检测条件的优化至关重要。首先，流动相的选择对AFM1的分离和检测灵敏度有显著影响。通常，流动相由水相和有机相组成，水相常使用0