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高效液相色谱法测定食用油中多种抗氧化剂

一、1.高效液相色谱法概述

高效液相色谱法（HPLC）作为一种重要的分离分析技术，广泛应用于食品、药品、环境等领域的分析检测。该方法基于不同物质在固定相和流动相之间的分配系数差异，实现复杂混合物中各组分的分离。自20世纪60年代问世以来，HPLC技术不断发展，其分离效能、检测灵敏度和分析速度均得到了显著提升。据统计，目前全球HPLC市场年销售额已超过百亿美元，成为化学分析领域不可或缺的工具之一。

高效液相色谱法的基本原理是利用高压泵将流动相送入色谱柱，在色谱柱内，待分析样品与流动相相互作用，不同组分在固定相和流动相之间发生不同的分配，导致其迁移速率不同，从而实现分离。随着色谱柱填料技术的发展，目前常用的固定相包括反相、正相、离子交换、亲和色谱等。例如，在食用油中抗氧化剂的测定中，反相高效液相色谱法因其良好的分离性能和适用性而被广泛应用。

高效液相色谱法在食用油中抗氧化剂的测定中具有显著优势。首先，该方法能够有效分离食用油中多种抗氧化剂，如维生素E、多酚类化合物等，实现单一组分的高灵敏度检测。其次，高效液相色谱法结合紫外、荧光、电喷雾等检测器，能够实现纳克级别甚至皮克级别的检测限，满足食品安全标准对抗氧化剂残留量的要求。例如，我国食品安全国家标准GB2763-2016《食品安全国家标准食品中污染物限量》规定，食用油中维生素E的限量为50mg/kg。通过高效液相色谱法，研究者能够准确测定食用油中维生素E的含量，确保食品安全。

二、2.抗氧化剂的提取与净化

(1)食用油中抗氧化剂的提取与净化是高效液相色谱法测定过程中的关键步骤。提取过程中，通常采用溶剂萃取法、超声波辅助提取法或微波辅助提取法等。溶剂萃取法利用有机溶剂如正己烷、石油醚等，能够有效地从食用油中提取抗氧化剂，但需注意溶剂残留问题。超声波辅助提取法通过超声波振动破坏细胞结构，提高提取效率，且操作简便、成本低廉。微波辅助提取法则利用微波能量加速溶剂分子运动，提高提取速率，但需控制微波功率和时间，避免过度提取。

(2)提取后的样品往往含有油脂、色素、蛋白质等杂质，直接进样分析会导致色谱柱堵塞、峰形变差等问题。因此，提取后的样品需要进行净化处理。常用的净化方法包括固相萃取（SPE）、液-液萃取、吸附柱净化等。固相萃取法利用固相吸附剂对目标化合物进行选择性吸附，通过洗脱液将目标化合物从吸附剂上洗脱下来，实现净化。液-液萃取法利用两种互不相溶的溶剂，通过分配系数差异实现目标化合物的分离。吸附柱净化则是利用吸附剂对目标化合物进行吸附，通过适当的洗脱液将目标化合物从吸附剂上洗脱下来。

(3)在实际操作中，根据样品特性和目标化合物的性质，选择合适的提取和净化方法。例如，对于多酚类抗氧化剂的提取，常用50%甲醇水溶液作为提取溶剂，通过超声波辅助提取法进行提取。提取后，采用C18固相萃取小柱进行净化，以去除油脂、色素等杂质。净化后的样品经适当稀释后，可直接进行高效液相色谱分析。此外，提取和净化过程中还需注意样品的保存条件，避免抗氧化剂降解，确保分析结果的准确性。

三、3.高效液相色谱法的操作步骤

(1)操作高效液相色谱法测定食用油中多种抗氧化剂时，首先需配置合适的工作环境。确保实验室温度和湿度稳定，避免外界因素影响分析结果。同时，检查仪器设备，包括高效液相色谱仪、紫外检测器、色谱柱、流动相储存容器等，确保其正常工作。

(2)分析前，准确配制流动相，通常采用混合溶剂，如乙腈-水溶液或甲醇-水溶液。根据抗氧化剂的特性，调整流动相的pH值，以优化分离效果。将配制好的流动相过滤除菌，并通过0.45μm的滤膜过滤，以防止颗粒物质堵塞色谱柱。同时，设置合适的流速和柱温，通常流速为1.0mL/min，柱温为30℃。

(3)样品处理完成后，将净化后的样品注入高效液相色谱仪。在分析过程中，实时监控色谱峰，确保分离效果满意。记录色谱图，分析目标化合物的保留时间和峰面积。根据标准曲线，计算样品中抗氧化剂的含量。完成分析后，关闭仪器，清洗色谱柱，为下次分析做好准备。

四、4.数据分析与结果解释

(1)数据分析是高效液相色谱法测定食用油中抗氧化剂的关键步骤。通过色谱工作站或数据分析软件，对色谱图进行峰提取、峰面积积分和峰高计算。以某食用油样品中维生素E的测定为例，假设样品中维生素E的标准曲线回归方程为y=3.5x+7.8，其中y为峰面积，x为维生素E的浓度（mg/L）。对样品色谱图中的维生素E峰进行积分，得到峰面积为35.5，代入标准曲线方程计算，得出样品中维生素E的浓度为12.4mg/L，与实际添加量10mg/L基本一致，表明该方法具有良好的准确性。

(2)结果解释时，需考虑样品中抗氧化剂的含量、检测限、回收率等因素。以某市售橄榄油