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一实验项目蛋白质的盐析与透析凝胶过滤法分离Hb与核黄素
（一）蛋白质的盐析与透析盐析实验原理:在溶液中加入中性盐使生物大分子沉淀析出的过程称为“盐析”。蛋白质溶液为亲水溶胶体系，其稳定因素：水化膜和电荷。加入大量中性盐后，夺走了水分子，破坏了水膜，暴露出疏水区域，同时又中和了电荷，破坏了亲水溶胶，蛋白质分子即形成沉淀。
蛋白质的盐析与透析-原理
蛋白质的盐析与透析-原理不同的蛋白质分子，由于其分子表面的极性基团的种类、数目以及排布的不同，其水化层厚度不同，故盐析所需要的盐浓度也不一样，因此调节蛋白质的中盐浓度，可以使不同的蛋白质分别沉淀。
蛋白质的盐析与透析-实验操作盐析血清1ml
逐渐加入饱和(NH4)2SO4
溶液１ml，边加边搅拌。
离心３０００rpm10分钟
上清沉淀（球蛋白）
逐渐加入固体(NH4)2SO4
１％HCl1-2滴离心５分钟沉淀（清蛋白）
透析实验原理:蛋白质是大分子物质，它不能透过透析膜，而小分子物质（无机盐、单糖等）可以自由通过透析膜与周围的缓冲溶液进行溶质交换，进入到透析液中。在实验室分离纯化蛋白质的过程中，常利用透析的方法除去蛋白质溶液中的小分子物质。
按照分子大小进行分离。分离取决于透析袋截留分子量。
相对分子质量较大的物质由于直径大于凝胶网孔被完全排阻在孔外，只能在凝胶颗粒外的空间向下流动，因此流程较短，移动速度快；所以首先流出。相对分子质量较小的物质由于直径小于凝胶网孔，可完全渗透进入凝胶颗粒的网孔，在向下移动过程中，因此流程较长，移动速率慢；所以最后流出。
凝胶过滤-原理中等大小的分子，它们在凝胶颗粒内外部分渗透，渗透的程度取决于它们分子的大小，所以它们流出的时间介于二者之间，这样分子大的组分先流出，分子小的组分后流出。这样样品经过凝胶层析后，各个组分便按分子从大到小的顺序依次流出，从而达到了分离的目的。
凝胶层析法分离蛋白质-操作凝胶的制备与装柱：向层析柱内加蒸馏水赶走在层析柱的死体积和接口处的气泡，在蒸馏水高度约占体积的1/3时，关闭下端出口，自顶部缓缓加入已处理好的SephadexG-50悬液，待底部凝胶沉积1~2cm时，打开出口，凝胶加至凝胶沉积离层析柱口约3cm后，用3～5倍体积洗脱缓冲液平衡。装柱注意点：不得有气泡和分层；凝胶表面应平整；柱床体积稳定；不能让凝胶表面露出水面。
凝胶层析法分离蛋白质-操作2.加样：将出口打开，使表面的蒸馏水流出，直至恰好与表面相平（不可使床面干掉），关紧出口，用滴管将样品缓缓地加到床表面，注意尽量不要使平整的床表面搅动，然后打开出口，让样品进入床内，直至床面恰好露出，用洗脱液洗涤。
凝胶层析法分离蛋白质-操作2.洗脱：洗脱时要控制流速为4m1/3min。观察Hb和核黄素的分离。3.凝胶的回收：用蒸馏水洗涤凝胶层析柱10分钟即可。取下层析柱，将上下口打开，从上口处用吸耳球一吹胶即可从下口流出，凝胶可以灭菌保存，干燥保存，和防腐剂保存。
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