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医院医技科室诊疗规范

第2章病理学基本技术规范

第一节病理组织学诊断检材的制备技术

一、组织的固定

㈠凡需要进行病理组织学检查的标本(器官或组织)，于离体(活体或尸体)后，应尽快置放(浸泡)于装有足够量固定液的容器中固定。固定液量应为被固定标本体积的5~10倍。置放标本的容器大小视标本和固定液的体积而定，应适当大一些。临床科室切取的标本置放于容器中固定后，应尽快送交病理科继续固定。未能及时、充分固定的干涸或腐败标本不能再进行固定和用于制做切片。

㈡常规固定液为4%中性甲醛(10%中性福尔马林)，应预先多量配制贮存，以备随时使用。小标本的固定时间为4~6小时，大标本为18~24小时或更久。

㈢根据病理学特殊检查(特殊染色和组织化学染色、免疫组织化学染色和原位核酸分子杂交染色、电镜观察等)的需要，应选用其他适宜的固定液进行固定[参见后述的“㈦固定液的常用种类和制备”]。

㈣器官、组织固定的基本方法

[另参见本章第四节(病理标本的肉眼检查和组织学切片取材技术)]

1.食管、胃、肠、胆囊、膀胱等空腔器官：依规范方法剪开后，按其自然状态平铺于硬纸板上(重点暴露黏膜面或内表面的病变处)，并用大头针将标本边缘处固定于纸板上，然后放入4%中性甲醛中固定(黏膜面或内表面朝向容器的液面，并覆盖薄层脱脂棉)。

2.肝、脾：由器官背面，沿其长轴每间隔1.5~2.0cm纵向平行剖开，切成数片。将每片肝或脾轻轻地平放于装有4%中性甲醛的容器中，容器底面衬以脱脂棉。应避免标本弯曲和相互间的叠压。

3.肺叶：放入固定液中的肺叶漂浮于液面，需在肺表面覆盖薄层脱脂棉。必要时从支气管注入适量4%中性甲醛。

4.肾：沿肾外缘中线朝肾门方向作一水平切面(深达于肾盏)，再行固定。

5.淋巴结：先用4%中性甲醛固定1小时后，再沿其长轴切成数片(厚2~3mm)，继续固定。

6.骨组织：先锯成小片(若是长骨应作横向锯片)，在4%中性甲醛中固定24小时后，再进行脱钙。

7.微小组织或液体沉淀物：先用拭纸或滤纸妥为包裹(需用大头针扎牢)，然后放入专用小盒内进行中性4%甲醛固定，以防检材遗失。

8.凡进入固定程序的标本必须连带其正确无误的病理检验号(病理号)。

㈤多数固定液对人体有害，需要防护，必须在封闭的通风条件下进行操作。

㈥组织块的切取和固定：①由较大标本切取用于制作切片的组织块(取材)时，应与标本的断面平行，组织块厚度一般为0.3cm(不应0.5cm)，面积一般在1~1.5×1~1.5以内。②切取组织块的形状，在充分包括肉眼病变的前提下尽量规则些(例如方形、矩形、三角形等);由一个标本切取的多块组织的形状有所不同，便于蜡块与其相应切片的核对。③固定组织块的固定液量，一般应为组织块总体积的5~10倍以上。④室内常温(25℃左右)下的固定时间为3~24小时;低温(4℃)下的固定时间应延长。⑤固定组织块的容器要大一些。⑥组织块固定期间需要间断地轻摇或搅动固定液以利于固定液的渗入。

㈦常用固定液

1.4%中性甲醛(10%中性福尔马林)固定液

甲醛(40%)100ml

无水磷酸氢二钠6.5g

磷酸二氢钠4.0g

蒸馏水900ml

2.乙醇-甲醛(酒精-福尔马林，AF)固定液

甲醛(40%)100ml

95%乙醇900ml

[说明]一般组织块经乙醇-甲醛固定1～2小时后，即可移入95%乙醇内脱水。

3.Carnoy固定液

无水乙醇60ml

氯仿30ml

冰醋酸10ml

[说明]组织化学染色的常用固定液，组织经Carnoy液固定1～2小时后，即可移入无水乙醇中脱水。

4.Zenker固定液

升汞5.0g

重铬酸钾2.5g

硫酸钠1.0g

蒸馏水(加至)100ml

[说明]配制本液时，先将升汞溶于蒸馏水中、加温至40～50℃溶解后，再加入重铬酸钾，最后加入硫酸钠，贮存待用。使用前加入5ml冰醋酸，混合。组织块需固定12~24小时。切片染色前，需进行脱汞沉淀处理。

5.Bouin固定液

饱和苦味酸水溶液(约1.22%)75ml

甲醛(40%)25ml

冰醋酸5ml

[说明]本液临用时配制。组织块置于Bouin液固定12～24小时即可(小块组织只需固定数小时)。经Bouin液固定的组织被苦味酸染成黄色，可用水洗涤12小时后进入乙醇脱水(兼脱色)。不必将组织中的黄色除净(残存于组织中的苦味酸无碍染色)

6.过碘酸-赖氨酸-多聚甲醛固定液(PLP)

A液：赖氨酸1.827g

蒸馏水50ml

0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4)50ml

B液：8%多聚甲醛水溶液100ml

[说明]本液临用时配制：取A液3份、B液1份，混合后，加入过碘酸钠，使液体终浓度为2%。组织块在4℃下固定36~54小时。本液对细胞结构和抗原性保存较好。

7.B5(醋酸钠