植物体细胞杂交.ppt

第35页,共56页，星期六，2024年，5月第36页,共56页，星期六，2024年，5月第37页,共56页，星期六，2024年，5月电融合芯片缺点①常规电融合系统中异源细胞的准确配型难以实现与生物和化学融合方法相比，电融合方法由于效率较高、操作简便、对细胞无毒害、便于观察、适于仪器应用和规范操作，成为了主要的手段。不过，常规融合系统中融合配型难以控制，目标配型的产率仍然很低。因此，细胞电融合技术的研究进入微观层次，希望通过微操作方法来实现精确的细胞操作，从而解决融合配对特异性差的缺陷，同时提高自动化程度和融合效率。目前，显微操作的应用虽可以提高配型的准确度，但自动化程度和效率都很低。②现有电融合系统中微电极数目偏少，难以提高细胞融合效率现有的电融合系统中融合电极一般只有少数几对，可以同时控制和融合的细胞有限，造成融合效率不高。③常规融合仪器中融合电压很高，有潜在安全隐患，也不利于设备微型化现有细胞电融合仪器中电极间距一般为200～1000μm，细胞电穿孔所需电压在几百伏特以上。过高的电压对实验者造成不安全因素，同时，对融合后的细胞存活率也带来不利的影响。另外，所需电压越高，细胞融合仪设备制造难度也相应提高。设备研制成本很高，体积较大，难以实现便携化，限制了该技术的广泛应用。④多核融合细胞比例过高现有细胞电融合方法中，多细胞排列成细胞串的比例很高，由此带来的一个严重问题是融合细胞中多核细胞（多个细胞融合而成）的比例也相当高。这种细胞难以存活和分化，也大大降低了实际融合效率。⑤电融合芯片技术不甚完善现有电融合芯片技术还处于相当初级的阶段，电极数量少、细胞控制困难、融合配对准确性和融合效率难以同时得到保障，与其它微流控细胞研究技术的集成度也很低。第38页,共56页，星期六，2024年，5月空间细胞融合技术植物细胞融合过程中由于地球重力的存在,有无液泡的原生质体密度差很大,异源细胞融合率低。20世纪80年代以来,在空间材料科学的启发下,试图利用空间微重力条件改进细胞融合技术。空间细胞融合技术是直接为生物加工服务的,例如将抗药性或胞质雄性不育等细胞质基因导入另一个体细胞,有可能形成新的核质杂种;通过诱导不同种间、科属间原生质体融合,可以打破远源杂交不亲和性,广泛组合各种基因型,形成正常重力下无法获得的新型杂种植株。第39页,共56页，星期六，2024年，5月生物诱导融合法——仙台病毒法仙台病毒是一类被膜病毒，属于附黏液病毒族，它是多形性颗粒，直径为50～60nm，由两层磷脂组成的外膜包裹着RNA和蛋白质复合体，外膜上有两种糖蛋白，一种是HANA蛋白质，一种是F蛋白质，前者具有神经氨酸酶和血凝活性（分子量较大），后者具有融合和溶血作用（分子量较小）。仙台病毒诱导细胞融合的机理是：病毒被膜上的两种糖蛋白可和细胞膜表面的糖蛋白发生相互作用，从而使两个细胞可以互相接触，在电镜下观察到在相接触的相邻细胞表面之间将产生一些微小的细胞质桥。随着时间的推移，细胞质桥数量和桥的体积也在增加，最后相邻细胞的细胞质就结合在一起了，形成细胞凝集块再通过膜上蛋白质分子的重新排列，使膜中脂类分子重排而打开质膜，最后导致细胞融合。第40页,共56页，星期六，2024年，5月在利用仙台病毒诱导细胞融合实验中主要包括以下四个步骤：（1）先将亲本细胞（待融合的细胞）分别制成悬浮液、混合离心；（2）将沉积细胞悬于灭活的仙台病毒悬液里，在4oC低温下摇动20分钟，使细胞形成凝集块；（3）再将温度升至37oC，间歇摇动30分钟，使其融合；（4）洗去病毒，将融合细胞浮于选择性培养基进行培养。由于4oC低温利于细胞聚集，在融合时需要提高温度，否则融合不会发生。第41页,共56页，星期六，2024年，5月体细胞杂种的鉴定及应用领域细胞融合产生的杂种及后代需经过杂种性质的鉴定，而体细胞杂种用于育种实践时，则应进行再生植株及后代的遗传分析，一般包括形态学标记、细胞学标记、原位杂交分析以及各种生化及分子标记分析。第42页,共56页，星期六，2024年，5月形态标记形态标记即植物的外部特征，如花的形状及颜色、果实(种子)的形状及颜色、叶型、表皮毛、株型、穗型、千粒重、耐逆性以及对疾病的抗性等。形态标记简单直观，但是标记少、多态性差、易受环境条件和其它修饰基因的影响，并且许多性状为数量性状，由几个位点控制，表现为一个范围，而不是简单的性状差异。第43页,共56页，星期六，2024年，5月细胞学标记细胞标记主要包括染色体核型(染色体数目、大小、随体、着丝点位置等)和带型(C带、N带、G带等)。细胞学标记位点较少，而且对于亲缘关系较近的物种，由