小叶白蜡组培快繁技术规程.docxVIP

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DB××/T××××—2021

小叶白蜡组培快繁技术规程

1范围

本文件规定了小叶白蜡（FraxinusbungeanaDC.）组织培养快速繁殖技术的术语和定义、培养基的配制、无菌体系的建立、培养条件、诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗、驯化移栽、苗期管理、定植、技术档案管理等育苗技术。

本文件适用于辽宁省范围内小叶白蜡的组培快繁育苗。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6001育苗技术规程

LY/T1882-2010林木组织培养技术规程

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

小叶白蜡FraxinusbungeanaDC.

又名小叶花曲柳、小叶梣，属木犀科（Oleaceae）白蜡树属（Fraxinus）落叶小乔木或灌木。其生物学特性、生态学特性及用途参见附录A。

3.2

污染

培养基或培养材料生长有真菌或细菌等微生物的现象。3.3

母液

为称量准确和方便，按照培养基配方将培养基的成分配制成一定浓度和比例的溶液或混合溶液。3.4

外植体

植物组织培养中使用的各种接种材料。

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DB××/T××××—20213.5

诱导培养

把灭过菌的外植体接种于琼脂培养基上，诱导出愈伤组织或芽的培养过程。3.6

增殖培养

将培养材料周期性的分株，分割后转接入新鲜培养基中继续培养的过程。3.7

增殖系数

一个培养周期内试管苗增殖的倍数，即单芽培养一个周期后的平均增殖芽数。3.8

生根培养

诱导无根离体芽苗产生根的培养过程。3.9

试管苗

通过植物组织培养产生的离体小植株。3.10

组培苗

试管苗经过驯化后产生的完整植株。3.11

丛生芽

由多个基部相连的离体小芽组成的一团芽。3.12

炼苗

试管苗及培养容器一起移至室外近自然环境中培养，提高苗木的木质化程度，增强苗木对自然光照和温差变化适应能力的过程。

3.13

驯化

炼苗后的试管苗，移栽到驯化基质中，适应自然光照、温湿度变化而使之成活的过程。

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DB××/T××××—20213.14

移栽

驯化后的组培苗种植到温室或扦插棚移栽基质中，并使苗木逐渐适应自然条件下健壮生长的过程。3.15

定植

移栽后的组培苗种植在圃地。

4培养基的配制

4.1WPM培养基母液的配制和保存

4.1.1制作培养基前需先配制培养基母液，WPM培养基母液配制比例参见附录B。

4.1.2母液配制应用蒸馏水。

4.1.3配制大量元素母液时，每个组分单独溶解，避免沉淀发生。

4.1.4配制后的母液应置于4℃冰箱中冷藏保存，微量元素母液用棕色瓶盛装保存，母液配制后应及时使用，贮存时间不宜超过3个月。

4.1.5母液容器上应贴好标签，注明名称、配制日期，发现母液中有沉淀或絮状物出现应停止使用。

4.2植物生长调节物质母液的配制

4.2.1植物生长调节物质母液的配制浓度为0.1mg/mL~1.0mg/mL，其配制方法参见附录C。

4.2.2母液配制好后贴好标签并置于4℃冰箱中冷藏，保存期不超过3个月。

4.3培养基的制作

4.3.1准备好培养容器（1L烧杯）、蒸馏水、琼脂粉、蔗糖和各类母液等。

4.3.2先用烧杯盛有少量蒸馏水，按附录B吸取母液，即一次加入已计算好的大量元素、微量元素、铁盐、有机成分。

4.3.3按蔗糖浓度20g/L，计算用量，称量后用蒸馏水溶解，然后用容量瓶定容。

4.3.4将称量好的琼脂粉6g/L加入烧杯中加热搅拌至完全溶解。

4.3.5根据要求加入计算好的激素，玻璃棒搅拌均匀。

4.3.6充分搅拌后，用pH试纸调节酸碱度，用0.1mg/L的HCI或1mg/LNaOH调节pH值至5.6~5.8。

4.3.7根据不同需要若进行定量分装时，要尽快将培养基分装到培养瓶内，以免培养基凝固或变稠而难以分装。

4.3.8分装培养基时，勿将培养基粘在培养瓶瓶口，沾上后应立即擦拭干净，否则容易引起污染。分装后立即盖好瓶盖并拧紧。

4.4培养基的灭菌

4.4.1将分装好的盛有培养基的培养瓶放入高压蒸汽灭菌锅内灭菌。

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4.4.2加热初期，当高压灭菌锅内的气压达0.05Mpa时，打开冷凝阀，排尽灭菌锅内的冷空气。

4.4.3当灭菌锅内气压达到0.1Mpa、温度升至121℃时开始计时，保持温度并进行压力灭菌20min。

4.4.4关闭加热电源开关，以慢排方式排放热