污染物生物效应检测.ppt

*2、突变意义（1）农业作物育种：在农业生产中，农作物就是通过定向突变筛选获得优良品种。（2）从理论上讲，突变可能会出现有益的后果，但由于概率极小，且无法鉴别和控制，所以，外来化学物对人类引起的致突变可能有很大的潜在危险。所以，从毒理学角度，突变一般认为是外来化合物毒性作用的表现。第61页，共103页，星期日，2025年，2月5日*3、致突变试验试验方法致突变试验：可分基因点突变试验、染色体畸变试验和DNA损伤试验等，可在活体或体外进行。有（1）体外基因突变试验，（2）细胞遗传学实验，（3）体内基因突变试验，（4）DNA损伤试验等。第62页，共103页，星期日，2025年，2月5日*（一）体外基因突变试验（Invitromutationtest）1、鼠伤寒沙门氏菌试验法（1）基本原理将一种营养缺陷型如不能合成组氨酸的鼠伤寒沙门氏菌和化学致突变物接触，若此化合物是致突变性的，则可使此突变微生物发生回复突变，重新成为野生型，而能在不含或少含His的培养基中生长。据此鉴定化合物的致突变作用。为使受试物在体外测试中获得同活体类似的代谢活性，在培养基中常加入哺乳动物肝细胞的微粒体和受氢系统。第63页，共103页，星期日，2025年，2月5日*（2）方法优缺点优点：方法简单；快速，一般在48h内可得出结论；费用低；灵敏，检测结果与动物致癌性相符率达90%。缺点：1）微生物的遗传信息含量低，仅为哺乳动物的1/6。2）微生物DNA修复系统没有哺乳动物复杂而精巧。3）微生物无免疫功能。4）对于不在肝脏代谢转化的化合物，如苏铁素，不能检测其突变性。第64页，共103页，星期日，2025年，2月5日*2、哺乳动物体细胞株突变试验基本原理：有些哺乳动物突变细胞株系，当与化学致突变物接触后会发生回复突变，代谢发生改变，依此确定毒物的致突变性。常用细胞突变系：中国地鼠肺细胞V79、中国地鼠卵巢细胞株CHO和小鼠淋巴瘤L5178Y细胞株等。第65页，共103页，星期日，2025年，2月5日*（1）肺细胞V79和卵巢细胞株CHO细胞突变株系由于嘌呤碱类似物如6-巯基嘌呤可抑制DNA的合成，正常细胞株系生长会受到抑制。而V79和CHO细胞突变株系由于缺乏次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(HGPRT)，当在培养基中加入某些嘌呤碱类似物如6-巯基嘌呤等时，它们仍能生长。当V79和CHO细胞突变系与这些嘌呤碱类似物接触后，会发生回复突变成正常株，生长受到抑制，说明发生了致突变。第66页，共103页，星期日，2025年，2月5日*（2）小鼠淋巴瘤L5178Y细胞株此细胞株系缺乏胸苷激酶(TK),如在培养基中加入细胞毒素5-溴脱氧尿苷，仍能生长。但当此种细胞系与致突变物接触后会发生回复突变，又转化为正常细胞，而恢复对此毒素的利用，而抑制其生长。说明发生了致突变。第67页，共103页，星期日，2025年，2月5日*（二）细胞遗传学实验(CytogeneticsTest)1、染色体畸变试验(Chromosomeaberrationtest)利用光学显微镜直接观察生物体细胞在受致突变物作用后,染色体数目和结构的变化。(1)离体试验：常用中国地鼠卵巢细胞株CHO（缺乏次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶)和人类外周血（指进入血液循环的血液，即平时所采血），检测卵巢细胞株CHO和人类淋巴细胞的染色体变化。(2)体内试验：常检查骨髓细胞、胸腺、脾、精原细胞的染色体的畸变。第68页，共103页，星期日，2025年，2月5日*CHO细胞系或人类淋巴细胞染色体畸变分析1）选用细胞培养液如DMEM、RPM或1640任一种，加入化学致突变物，在3℃下，培养CHO（缺乏次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶)细胞24h或人类淋巴细胞为72h。2）在收获细胞前2h，向培养液中加入秋水仙碱，以终止细胞分裂，使细胞分裂同步于分裂中期。3）离心得到沉淀细胞，然后制片镜检有无染色体畸变。4）观察染色体有无断裂、缺失、易位、形成环状结构等畸变，以及出现多处断裂的百分率。第69页，共103页，星期日，2025年，2月5日*第70页，共103页，星期日，2025年，2月5日*染色体畸变结果评定确