细胞生物学细胞生物学研究方法.ppt

植物细胞培养植物组织培养原生质体培养单倍体培养第三节细胞工程与细胞培养第55页，共67页，星期日，2025年，2月5日非细胞体系（P72）定义：来源于细胞，不具备完整的细胞结构，但包含了进行正常生物学反应所需的物质（如供能系统和酶反应体系等）组成的体系即为非细胞体系。应用：近年来，非细胞体系在研究DNA复制、RNA转录、蛋白质合成、高尔基体的膜泡运输机制及细胞核装配（染色质、核膜、核骨架装配）等方面显示了重要作用。第三节细胞工程与细胞培养第56页，共67页，星期日，2025年，2月5日细胞融合与细胞杂交技术细胞融合：自发或人工诱导下，两个不同基因型的细胞或原生质体融合形成一个杂交细胞。诱导细胞融合的方法生物方法：灭活的仙台病毒、副流感病毒和新城鸡瘟病毒化学方法：聚乙二醇PEG物理方法：电击和激光第三节细胞工程与细胞培养第57页，共67页，星期日，2025年，2月5日第三节细胞工程与细胞培养单克隆抗体技术免疫技术细胞融合细胞培养：选择性细胞培养、克隆培养第58页，共67页，星期日，2025年，2月5日细胞拆合与显微操作技术细胞拆合：物理方法：机械方法或超声处理去核化学方法：松胞素处理使细胞排核，再离心得到胞质体和核质体。第三节细胞工程与细胞培养第59页，共67页，星期日，2025年，2月5日二、电子显微镜以电子束作为光源扫描电子显微镜利用二次反射电子成像，主要用来观察样品表面的形态特征。透射电子显微镜利用透过的电子成像，用来观察细胞内部的详细结构。第一节细胞的形态观察技术第23页，共67页，星期日，2025年，2月5日FigureLimitofresolutionoftheelectronmicroscope.Electronmicrographofathinlayerofgoldshowingtheindividualfilesofatomsinthecrystalasbrightspots.Thedistancebetweenadjacentfilesofgoldatomsisabout0.2nm(2?).第24页，共67页，星期日，2025年，2月5日二、电子显微镜1、基本构造电子束照明系统：成像系统：电磁透镜真空系统：记录系统：荧光屏或感光胶片第一节细胞的形态观察技术第25页，共67页，星期日，2025年，2月5日第26页，共67页，星期日，2025年，2月5日第27页，共67页，星期日，2025年，2月5日第28页，共67页，星期日，2025年，2月5日电子显微镜能不能取代光学显微镜呢？第29页，共67页，星期日，2025年，2月5日二、电子显微镜2、电子显微镜的优缺点优点：比光学显微镜分辨率高缺点：不能观察活的生物样品，而且不能观察细胞全貌。第一节细胞的形态观察技术第30页，共67页，星期日，2025年，2月5日二、电子显微镜3、电子显微镜制样技术超薄切片技术（厚度40～50nm）电镜负染色技术冷冻断裂和冷冻蚀刻技术电镜三维重构技术第一节细胞的形态观察技术超薄切片技术：固定、包埋、切片、染色染色剂：重金属，成黑白图像冷冻蚀刻电镜技术主要用于膜断裂面的蛋白质颗粒和膜面结构，深度蚀刻主要用于观察胞质中的细胞骨架纤维及其结合蛋白电镜三维重构技术适于分析难以形成三维晶体的膜蛋白及病毒和蛋白质-核酸复合物等大的复合体的三维结构第31页，共67页，星期日，2025年，2月5日第32页，共67页，星期日，2025年，2月5日三、扫描隧道显微镜分辨率：横向为0.1～0.2nm，纵向可达0.001nm。用途：是探测微观世界物质表面形态的仪器，三态（固态、液态和气态）物质均可进行观察。可直接观察生物大分子生物结构的原子排列，并且可避免损伤样品。工作原理第一节细胞的形态观察技术第33页，共67页，星期日，2025年，2月5日三、扫描隧道显微镜第一节细胞的形态观察技术STMimage,BenzenemoleculesaccumulateatstepedgesonCu2500万倍硅晶体表面DNA第34页，共67页，星期日，2025年，2月5日第一节细胞的形态观察技术第35页，共67页，星期日，2025年，2月5日细胞组分的分析方法细胞组分的分离细胞组分的分析定量细胞化学技术第二节细胞组分分析技术第36页，共67页，星期日，2025年，2月5日一、细胞组分的分离细胞组分的获得：