《牛奶中7种喹诺酮类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》 文本.docx

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牛奶中7种喹诺酮类残留量的测定液相色谱-串联质谱法

1范围

本文件规定了牛奶中喹诺酮类抗生素（恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、达氟沙星、氧氟沙星、沙拉沙星、洛美沙星）的液相色谱-串联质谱检测方法。

本文件适用牛奶中7种喹诺酮类的测定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

试样经2%的甲酸乙腈溶液提取，经QuEChERS分散固相萃取净化，反相色谱柱分离，供液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。

5试剂和材料

本方法所用的试剂，除另有规定外，均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

5.1试剂

5.1.1乙腈：色谱纯。5.1.2甲酸：优级纯。

5.1.3无水硫酸镁：优级纯。

5.1.4十八烷基（C18）粉末：粒径50μm。

5.1.51%甲酸乙腈溶液：取1.0mL甲酸，用水溶解定容到100mL，摇匀。

5.1.62%甲酸乙腈溶液：取2.0mL甲酸，用乙腈溶解定容到100mL，摇匀。5.1.70.2%甲酸水溶液：取2.0mL甲酸，用水溶解定容到1000mL，摇匀。

5.1.80.2%甲酸乙腈溶液：取2.0mL甲酸，用乙腈溶解定容到1000mL，摇匀。

5.2标准品

7种喹诺酮标准品名称、化学分子式和CAS号见附录表A。

5.3标准溶液配制

5.3.1标准储备液（1.0mg/mL）：分别准确称取7种喹诺酮类标准物质适量，用乙腈(5.1.1)溶解并定容至10.0mL容量瓶中，避光冷冻贮存，保存期限为3个月。

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5.3.2混合标准储备液（10.0μg/mL）：分别移取7种标准储备液100μL，混合后用乙腈(5.1.1)稀释至10.0mL容量瓶中，得到10.0μg/mL的混合标准储备溶液，避光冷冻贮存，保存期限为1个月。

5.3.3混合标准工作溶液：分别准确吸取不同体积混合标准储备液，用空白基质定容至1.0mL，配制成浓度为1.0~300.0ng/mL的标准工作溶液，临用现配。

6仪器和设备

6.1液相色谱-串联质谱仪：配备电喷雾离子源。6.2天平：感量0.00001g和0.01g。

6.3涡旋混合器。

6.4高速离心机：最大转速9000r/min。6.5超声波清洗器。

6.6氮吹仪。

6.7有机微孔滤膜，孔径0.22μm，或相当者。

7分析步骤

7.1试样制备

取适量样品混合均匀，4℃以下保存。

7.2提取与净化

7.2.1试样的提取

称取5.0g均匀制备的样品（精确到0.01g）于50.0mL具塞离心管中，加入10.0g无水硫酸镁（5.1.3），涡旋混匀，加入10mL甲酸乙腈（5.1.6），涡旋混匀，超声20min，8000r/min离心3min，取上清液，残渣再加10mL甲酸乙腈（5.1.6）重复提取一次，合并上清液，待净化。

7.2.2试样的净化

吸取5mL上层清液，置于预先装有100mgC18（5.1.4）、500mg无水硫酸镁（5.1.3）的离心管中，涡旋3min，8000r/min离心5min，取上清液于40℃水浴氮气吹至近干，初始流动相定容至1.0mL，涡旋混匀，用0.22μm有机滤膜过滤后，上机测定。

7.3仪器参考条件

7.3.1液相色谱参考条件

a）色谱柱：C18，2.1mm×150mm，粒径3.5μm或性能相当。

b）柱温：30℃。

c）流动相：A：0.2%的甲酸溶液（5.1.7），B：0.1%甲酸乙腈溶液（5.1.8）；梯度洗脱见表1。

d）流速：0.3mL/min。e）进样量：5μL。

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表1流动相及梯度洗脱条件

时间/min

流速/（mL/min）

流动相A/%

流动相B/%

0.00

0.3

95

5

2.00

0.3

95

5

2.01

0.3

40

60

9.00

0.3

20

80

9.01

0.3

95

5

11.00

0.3

95

5

7.3.2质谱参考条件

a）离子源：电喷雾离子源（ESI）。

b）扫描方式：正离子扫描。

c）检测方式：多反应监测（MRM）。

d）鞘气温度：350℃。

e）鞘气流速：11.0L/min。

f）雾化器压力：310.23kPa。

g）喷嘴电压：500V。