《牛奶中7种大环内酯和硝基咪唑残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》文本.docx

1

牛奶中7种硝基咪唑和大环内酯类残留量的测定液相色谱-串联

质谱法

1范围

本文件规定了牛奶中7种硝基咪唑和大环内酯类抗生素（甲硝唑、地美硝唑、洛硝达唑、林可霉素、阿奇霉素、替米考星、罗红霉素）的液相色谱-串联质谱检测方法。

本文件适用牛奶中7种硝基咪唑和大环内酯类的测定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

试样经乙腈提取，分散固相萃取法净化，反相色谱柱分离，供液相色谱-串联质谱仪测定，基质匹配外标法定量。

5试剂和材料

本方法所用的试剂，除另有规定外，均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

5.1试剂

5.1.1乙腈：色谱纯。5.1.2甲酸：优级纯。

5.1.3无水硫酸钠：优级纯。

5.1.4十八烷基（C18）粉末：粒径50μm。

5.1.5N-丙基乙二胺（PSA）粉末：粒径50μm

5.1.60.1%甲酸水溶液：取甲酸（5.1.2）1.0mL，用水溶解定容到1000mL，摇匀。

5.1.70.1%甲酸乙腈溶液：取甲酸（5.1.2）1.0mL，用乙腈（5.1.1）溶解定容到1000mL，摇匀。

5.2标准品

7种硝基咪唑和大环内酯类标准品名称、化学分子式和CAS号见附表A。

5.3标准溶液配制

5.3.1标准储备液（1.0mg/mL）：分别准确称取7种硝基咪唑和大环内酯类标准物质适量，用乙腈

T/NAIAXXX—2025

2

（5.1.1）溶解并定容至10.0mL容量瓶中，避光冷冻贮存，保存期限为3个月。

5.3.2混合标准储备液（10.0μg/mL）：分别移取7种硝基咪唑和大环内酯类标准储备液100μL，混合后用乙腈（5.1.1）稀释并定容至10.0mL容量瓶中，避光冷冻贮存，保存期限为1个月。

5.3.3混合标准工作溶液：分别准确吸取不同体积混合标准储备液，用空白基质定容至1.0mL，配制成浓度为为1.0~200.0ng/mL的标准工作溶液，临用现配。

6仪器和设备

6.1液相色谱-串联质谱仪：配备电喷雾离子源。6.2天平：感量0.00001g和0.01g。

6.3涡旋混合器。

6.4高速离心机：最大转速9000r/min。6.5超声波清洗器。

6.6氮吹仪。

6.7有机微孔滤膜，孔径0.22μm，或相当者。

7分析步骤

7.1试样制备

取适量样品混合均匀，冷藏保存。

7.2试液的提取与净化

7.2.1试液的提取

称取5.0g样品于50.0mL具塞离心管中，加入乙腈（5.1.1）15mL、无水硫酸钠50g，高速匀浆3min，8000r/min离心5min，取上清液；残渣再加乙腈（5.1.1）15mL重复提取一次，合并上清液，用乙腈定容至50.0mL，待净化。

7.2.2试液的净化

移取10.0mL上清液至装有150mgC18（5.1.4）和50mgPSA（5.1.5）的高速离心管中，涡旋5min，8000r/min离心5min，取上清液于45℃氮吹至近干，初始流动相复溶至1.0mL，上清液过0.22μm有机滤膜，滤液供HPLC-MS/MS分析。

7.3仪器参考条件

7.3.1液相色谱参考条件

a）色谱柱：C18，2.1mm×150mm，粒径3.5μm或性能相当。

b）柱温：35℃。

c）流动相：A：0.1%的甲酸溶液（5.1.6），B：0.1%甲酸乙腈溶液（5.1.7）；梯度洗脱见表1。

d）流速：0.3mL/min。e）进样量：5μL。

T/NAIAXXX—2025

3

表1流动相及梯度洗脱条件

时间/min

流速/（mL/min）

流动相A/%

流动相B/%

0.00

0.3

95

5

5.00

0.3

95

5

5.01

0.3

65

35

10.00

0.3

65

35

10.01

0.3

40

60

13.50

0.3

40

60

13.51

0.3

95

5

15.00

0.3

95

5

7.3.2质谱参考条件

a）电离方式：电喷雾离子源（ESI）。

b）扫描方式：正离子扫描。

c）检测方式：多反应监测（MRM）。

d）鞘气温度：325℃。

e）鞘气流速：10.0L/min。

f）雾化器压力：310.23kPa。

g）喷嘴电压：500V。

h）毛细管电压：3500V。

i）定性离子对、定量离子对、碎裂电压、碰撞能量等参数参见附录