血清学检验与生物制品课件.pptVIP

一血清學檢驗

定義：抗原及相應抗體在體外的特異性結合。在體外能發生可見的免疫反應。抗體主要存在於血清中，將這一反應稱為--。

(一)血清學試驗的特點：

1、特異性：抗原決定簇的組成、結構不同，所產生的抗體也就不同，一種抗原只能與相應抗體結合，表現出高度的特異性。

2、交叉性：

（二）用已知測未知：用已知抗原（抗體）監測未知抗體（抗原）。

（三）最適比與帶現象：最適比：抗原與抗體結合需要適當比例才能出現可見反應。帶現象：如抗原過多或抗體過多，大的抗原抗體複合物很難形成，不能出現可見的反應。（四）反應的可逆性：正常：溫度：0-40度，PH：4-9。當T60度，PH3時，發生可逆反應。（五）反應的兩階段型：第一階段：抗原抗體相互結合，作用快，形成的複合物較小，不出現可見反應。第二階段：在電解質作用下，形成大的複合物，出現各種可見反應，反應慢。

（六）反應的敏感性：極微量的抗原或抗體都能檢測。

二影響血清學實驗的因素1、電解質：常用的是氯化納，0.9%生理鹽水，促進可見現象的發生。

2、溫度：37度，適宜的溫度可增加抗原抗體活性及相互接觸的機會。

3、PH=6.8,PH=5-5.5,非特異性沉澱，PH=2-3,離解。4、振盪：加速碰撞，但過強可解離。

5、雜質：蛋白質、脂質、糖等雜誌時，抑制反應進行，或引起非特異性反應。故實驗設立對照。

三、血清學試驗的類型：（一）凝集試驗：顆粒性抗原與相應抗體結合後，在電解質存在下互相凝結成絮片狀團塊的現象。參與的抗原為凝集原，抗體為凝集素。１、直接凝集試驗：（1）平板凝集試驗：例如：沙門氏菌，痢疾桿菌，布氏桿菌病，血型鑒定。

（2）試管凝集試驗：抗原等量，抗體作倍比稀釋，37℃，50%以上為該血清的效價（滴度）。例如：布氏桿菌病，沙門氏菌。2、間接凝集試驗：將可溶性抗原（或抗體）吸附與免疫無關的顆粒表面，再與抗體結合，出現肉眼可見的凝集現象。

間接血凝試驗：以紅細胞為載體。

正向血凝實驗：紅細胞+抗原抗體。

反向血凝試驗：紅細胞+抗體抗原。

（二）沉澱試驗：可溶性抗原與相應抗體結合後，形成肉眼可見的白色沉澱。１、環狀沉澱試驗：d=3～4毫米試管中，抗血清加入管底，再將稀釋的抗原重疊其上，陽性：一～二分鐘出現反應，一小時，三-五h。例如：炭疽病診斷。

2、瓊脂擴散實驗：機理：略

例如：藍舌病，馬傳染性貧血，MD，傳染性法氏囊病。

（三）補體結合試驗：

1、原理：補體無特異性，能與任何抗原抗體複合物結合，紅細胞+溶血素+補體溶血，陰性。紅細胞+溶血素不溶血，為陽性

2、應用：牛付結核，乙型腦炎，馬鼻疽（四）中和試驗：病毒或毒素與相應抗體結合後，可失去對易感動物的致病力的實驗。

1、毒素、抗毒素的中和試驗：LD50常用

2、病毒中和試驗：（1）體外中和試驗（2）體內中和試驗例：

口蹄疫病毒(FMDV)4～7d乳鼠乳鼠死亡

FMDV+抗血清4～7d乳鼠乳鼠不死亡

例:

FMDV仔豬腎傳代細胞(IB-RS-2)單層細胞

細胞病變(CPU)：變圓、成串、空泡、變形、脫落、裂解

FMDV+抗血清IB-RS-2單層細胞細胞無病變CPU

（五）抗體標記技術：用螢光素、酶和同位素等對抗體進行標記的試驗技術。

1、螢光抗體技術：將螢光染料標記在抗體上製成螢光抗體，標記的抗體仍能與相應抗原結合並形成帶有螢光的抗原抗體複合物。螢光材料：異硫氰酸螢光素顯微鏡下的螢光螢光顯微鏡

（1）直接法：螢光染料+已知抗體監測未知抗原。（2）間接法：螢光染料標記在抗抗體上檢測未知抗原2、免疫酶標抗體技術：

利用抗原抗體的特異性結合和酶的高效特異的催化作用，顯色而建立起來的免疫檢測技術。酶標記抗體抗原複合物上的酶在遇到相應的底物時，能催化底物分解，並使底物中的供氫體呈現顏色反應。常用標記酶：辣根過氧化物酶（HRP）。作用底物為過氧化氫。供氫體：3，3`-二氨基聯苯胺（棕色沉澱）——免疫酶組織化學染色法；鄰苯二胺（橙色可溶物質）——酶聯免疫吸附試驗。