DB21T 3084-2018 羽绒制品中鹅绒的鉴别PCR法和实时荧光PCR法　.docxVIP

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DB21

辽宁省地方标准

DB21/T3084—2018

羽绒制品中鹅绒的鉴别PCR法和实时荧光PCR法

IdentificationofGooseDownFiberinFeatherandDownProducts-PCRmethodandreal-timefluorescencePCRmethod

2018-12-25发布2019-01-25实施

辽宁省市场监督管理局发布

DB21/T3084—2018

I

前言

本标准依据GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则编制。本标准附录A、附录B为资料性附录。

本标准由中华人民共和国大连海关提出并归口。

本标准起草单位：辽宁出入境检验检疫局检验检疫技术中心。本标准主要起草人：任亮、颜怀玉、孔平、王贵滨、肇慧君。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

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羽绒制品中鹅绒的鉴别PCR法和实时荧光PCR法

1范围

本标准规定了羽绒制品中鹅绒的PCR和实时荧光PCR鉴别方法。本标准适用于羽绒制品。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

3.1聚合酶链式反应polymerasechainreaction

一种模拟天然DNA复制的体外扩增法，在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸起点，以4种单核苷酸（dNTP）为底物，通过变性—退火—延伸的循环反应，使极少量的DNA的特定片段，在短短几小时内扩增上百万倍。

3.2实时荧光PCRreal-timefluorescencepolymerasechainreaction

在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过曲线对未知模板进行定量或定性分析的方法。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。bp：碱基对（basepair）

Ct值：每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数（cyclethreshold）DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonuleicacid）

DTT：二硫疏糖醇

dNTP：脱氧核苷酸三磷酸（deoxyribonucleosidetriphosphate）

5原理

用试剂盒法或其他等效DNA提取法提取样品中的DNA。针对鹅的线粒体DNA序列设计引物和探针，通过单PCR、实时荧光PCR技术，对DNA中的鹅成分分别进行特异性扩增，根据实验结果，判定样品中是否含有鹅绒。

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6试剂

6.1实验用水应符合GB/T6682中一级水的规格。

6.2组织和毛发提取试剂盒TaKaRaMiniBESTUniversalGenomicDNAExtractionKitVer.5.0(TaKaRaCode.9765)。参见附录A中A.1。

6.3PremixExTaq?(ProbeqPCR)(TaKaRaCode.RR390A)参见附录A中A.2。6.4100%乙醇。

6.5溴化乙锭溶液。

6.6DNALaddarMarker。

7设备与器具

7.1PCR仪

7.2实时荧光定量PCR仪

7.3电泳装置

7.4凝胶成像仪

7.5冰箱：4℃~20℃

7.6天平：精度为0.0001g

7.7分析研磨机

7.8微孔干浴器或水浴锅

7.9瞬时离心机

7.10涡旋混合器

7.111.5mL磁分离架

7.12微量可调移液器：0.1μL~2.5μL，1μL~10μL，2μL~20μL，10μL~100μL，20μL~200μL，100μL~1000μL。

7.131.5mL离心管，2.0mL离心管

7.14PCR薄壁管

7.15实时荧光PCR光学反应管

7.16超净工作台

8取样

从羽绒服或其他羽绒制品的不同部位取样，混合均匀后