《化妆品紧致功效体外测试方法 人源成纤维细胞增殖试验法》征求意见稿.pdf

ICS71.100.70

Y42

团体标准

T/ZHCAxxx-2022

化妆品紧致功效体外测试方法人源成纤

维细胞增殖试验

Methodforinvitrotestingofcosmeticfirmingefficacy–fibroblast

proliferationassay

（征求意见稿）

2022-xx-xx发布2023-xx-xx实施

浙江省健康产品化妆品行业协会发布

T/ZHCAxxx—xxxx

化妆品紧致功效体外测试方法人源成纤维细胞增殖试验

1范围

本文件规定了一种化妆品紧致功效的体外测试方法。

本文件适用于采用人源成纤维细胞增殖试验评价化妆品及原料的紧致功效。

2规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件。

3术语及定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

成纤维细胞fibroblast

普遍存在于结缔组织中的一种中胚层来源的细胞。分泌前胶原、纤连蛋白和胶原酶等细胞外基质，

伤口愈合过程中可迁移到伤口进行增殖。

3.2

细胞活性检测cellactivityassay

测定活细胞数量和/或细胞总数的方法，如MTT法。

4试验原理

成纤维细胞是皮肤的主要细胞成分，分布在皮肤的真皮层内，是疏松结缔组织中最常见的细胞，

可以产生大量的胶原蛋白与弹性纤维，对维持皮肤的结构稳定和皮肤弹性起到重要作用。

成纤维细胞的活力与增殖率决定着皮肤的紧致度进而影响到皮肤的状态。成纤维细胞的活力下降，

数量减少，就会导致皮肤衰老。因此，可以通过测试样品对人源成纤维细胞增殖情况的影响，来评价

样品的紧致功效。

在体外，细胞增殖情况可以通过MTT法来检测。MTT法，可间接反映活细胞数量，是一种通用的

细胞活性检测方法。

5试剂和材料

5.1DMEM培养液：低糖，葡萄糖含量1g/L。

5.2胰蛋白酶-EDTA溶液：胰蛋白酶浓度0.25%。

5.3新生牛血清（NBS）。

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5.4细胞培养液：含10%新生牛血清（5.3）的DMEM培养液（5.1）。

5.5噻唑蓝（MTT）：CAS：298-93-1，分析纯。

5.6二甲基亚砜（DMSO）：CAS：67-68-5，分析纯。

5.7磷酸盐缓冲液（PBS）：pH7.2~pH7.4。

5.8MTT溶液：称取MTT（5.1）0.25g，溶于50ml的磷酸缓冲液（PBS）中，配制成质量浓度为5mg/mL

MTT溶液，0.22μm滤膜过滤后，4℃避光保存，有效期：1周。临用前，用DMEM培养液（5.1）稀释

至0.5mg/mL，现用现配。

5.9细胞：原代人源成纤维细胞（10代以内）。

6仪器

6.1分析天平：分度值为0.0001g。

6.2二氧化碳培养箱。

6.3可调节移液器：1000μL、200μL、300μL多道移液器。

6.4超净工作台。

6.5离心机。

6.6倒置显微镜。

6.7细胞板振荡器。

6.8酶标仪。

7试验步骤

7.1预试验（细胞毒性试验）

7.1.1细胞接种

4

选用生长良好的人源成纤维细胞，消化后用细胞培养液制备成约1~210个/mL的细胞悬液，接

种到96孔板中，每孔200μL，边缘孔加入200μL的无菌PBS。放置于二氧化碳培养箱中培养24h±2h，

24h±2h后细胞融合度应达到20%~30%，若不在20%~30