植物组织培养的一般技术.ppt

植物组织培养的一般技术植物组织培养的一般技术操作技术培养基的成分及作用培养基的种类与选择培养基的配制方法操作技术洗涤灭菌无菌操作培养容器封口物的种类及制作有菌的范畴：凡是暴露在（未经处理的）空气中的物体，曾经接触过自然水源的物体，至少它的表面，毫无例外都是有菌的。它的内部在未经证实之前，也应该作为有菌物体来看待。无菌的范畴：经过高温灼烧或蒸煮过后的物体，经其他物理或者化学灭菌方法处理过后的物体，是无菌的。高层大气、岩石的内部，健康的动物和植物不与内外部表面接触的组织内部很可能是无菌的。强酸强碱、化学灭菌剂等表面和内部是无菌的。12无菌的世界远远小于有菌的世界！灭菌培养基的灭菌01不耐热的物质将采用过滤灭菌02玻璃器皿及耐热用具等可采用干热灭菌03用于无菌操作的器械采用灼烧灭菌04布制品采用高压灭菌05其他06植物材料的表面灭菌07灭菌大量元素01.微量元素01.铁盐01.有机成分01.琼脂01.糖01.植物激素01.PH01.其它成分01.在完善的培养基配方中至少应包括下述几个部分：培养基的成分及作用大量元素包括C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S等九种元素，他们占植物干重的百分之几十到万分之几植物所需要的元素，其浓度大于0.5毫摩尔/升应该属于大量元素生理作用：1）参与肌体构造；2）构成一些特殊的生理活性物质；3）电化学方面的作用:维持离子浓度平衡，胶体稳定，电荷平衡；4）发育方面起的作用：影响植物组织形态发生、器官形成。010203大量元素1植物所需要的元素，其浓度小于0.5毫摩尔/升应该属于微量元素。2微量元素包括Fe、Cu、Mo、Zn、Na、Mn、CoB和I等，通常培养基中添加10-7—10-5就可满足需要3生理作用：酶的催化、细胞分化和维持细胞完整机能等方面微量元素Cu有促进离体根生长的作用；01Mg、Zn、Na是酶的组成成份，也有防止叶绿素破坏的作用；03B与糖的运输、蛋白质的合成有关。05Mo是合成活跃硝酸还原酶所必不可少的元素，也是固氮酶的组成部分，还有防止叶绿素受破坏的作用；02Mn与植物的呼吸作用和光合作用有关；04多年的研究结果：01当缺乏某种元素时，往往会表现一些缺素症：02缺N：某些组织呈现鲜艳的花色素苷的色彩，导管不能形成；03缺N、P、K：细胞变得肥肿而形成层组织减少；04缺S：产生非常明显的黄萎病；缺Fe：细胞分裂停止；05缺B：细胞分裂和细胞生长延缓；06缺Mn或Mo：生长受影响。作用：促进细胞的分裂与生长；影响叶绿体的结构组成与叶绿素的形成。采用硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠结合成螯合铁配置而成铁盐维生素类：植物组织培养中经常使用维C、维B1（盐酸硫胺素）、维B6（盐酸吡哆素）、维H（生物素）、叶酸和烟酸等，一般使用的浓度为0.1——10mg/l01肌醇：本身没有促进生长的作用，但有助于活性物质的发挥，并参与糖代谢，能使培养组织快速生长，对胚状体和芽的形成有良好的影响02氨基酸：甘氨酸、丝氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、水解酪蛋白、水解乳蛋白03有机添加物：椰乳、香蕉等04有机成分琼脂一种从海藻中提取出来的凝固剂，一般使用浓度为0.6%—1%。以前使用琼脂条，现在使用琼脂粉，以色白、洁净的为好。糖糖的作用：a.作为C源，为细胞提供合成新化合物的碳骨架；b.为细胞的呼吸代谢提供底物与能源；c.维持一定的渗透势。使用最广泛的是蔗糖和葡萄糖，一般的使用浓度为2%—4%。一般来说，以蔗糖做糖原时，离体的双子叶植物的根生长得最好，而以葡萄糖为C源时，单子叶植物的根生长得最好。为了节省成本，一般选用食用白糖。生长素类01细胞分裂素类02其它植物激素赤霉素（GA3）脱落酸（ABA）多效唑（PP333）03植物激素01主要作用：诱导愈伤组织的形成、胚状体的产生以及试管苗的生根，更重要的是配合一定比例的细胞分裂素诱导腋芽和不定芽的产生。02常用的生长素类物质：2，4－D（2，4－二氯苯氧乙酸）、NAA（奈乙酸）、IAA（吲哚乙酸）、IBA（吲哚丁酸）。03它们作用强弱顺序：2，4－DNAAIBAIAA生长素类主要作用：促进细胞的分裂和器官的分化、延缓组织的衰老、增强蛋白质的合成、抑制顶端优势、促进侧芽的生长及显著改变其它的激素作用。常用的细胞分裂素类有：KT(激动素)、6-BA(6-苄基腺嘌呤)、ZT（玉米素）、2－iP（2－异戊烯腺嘌呤）、4PU、CPPU（吡效隆）和TDZ（噻重氮苯基脲）。作用的强弱顺序：TDZ,4PU